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  • 發布時間:2022-03-09 12:10 原文鏈接: 臨床化學檢查方法介紹中和試驗介紹

    中和試驗介紹:

      中和試驗是病毒或毒素與相應的抗體結合后,失去對易感動物的致病力的試驗方法。

    中和試驗正常值:

      人體處于動態平衡、健康狀態。

    中和試驗臨床意義:

      本試驗主要用于:①從待檢血清中檢出抗體,或從病料中檢出病毒,從而診斷病毒性傳染病;②用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑒定細菌的毒素類型;③測定抗病毒血清或抗毒素效價;④新分離病毒的鑒定和分型,中和試驗不僅可在易感的實驗動物體內進行,亦可在細胞培養上或雞胚上進行。試驗方法主要有簡單定性試驗、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。

    中和試驗注意事項:

      不合宜人群: 沒有。
      檢查前禁忌:注意正常的生活飲食習慣,注意個人衛生。
      檢查時要求:積極配合醫生。

    中和試驗檢查過程:

      (一)簡單定性中和試驗
      本法主要用于檢出病料中的病毒,亦可進行初步鑒定或定型。先根據病毒易感性選定試驗動物(或雞胚、細胞培養)及接種途徑。將病料研磨,并稀釋成一定濃度(約100 LD50-1 000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青霉素、鏈霉素各200-1 000單位),或用細菌濾器過濾,與已知的抗血清(適當稀釋或不稀釋)等量混合,并用正常血清加稀釋病料作對照。混合后置37℃1h,分別接種實驗動物,每組至少3只。分別隔離飼喂,觀察發病和死亡情況。對照動物死亡,而中和組動物不死,即證實該病料中含有與該抗血清相應的病毒。本法亦可用于毒素(如毒毒素)的鑒定和分型。
      (二)固定血清稀釋病毒法
      本法多將病毒作10倍遞增稀釋,分置2列試管,第一列加正常血清(對照組),第二列加待檢血清(試驗組)。混合后,置37℃作用1h,將各管混合液分別接種選定的試驗動物,每一稀釋度用3-5只動物。接種后,逐日觀察,并記錄其死亡數,觀察結束后,計算LD50和中和指數(表7-1、表7-2),本法適用于大量檢樣的檢測。
      本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體,對病毒而言,通常中和指數大于50者判為陽性,10-49為可疑,小于10為陰性。
      (三)固定病毒稀釋血清法
      本法用以測定抗病毒血清的中和價,將待檢血清2倍遞增稀釋,加等量已知毒價的病毒液(與血清混合后,每一接種劑量含病毒100LD50),搖勻后,置37℃作用1h,接種實驗動物。
      注:[1] 接種劑量0.1ml,含病毒100LD50;
      [2] 系指與病毒混合后的稀釋度;
      [3] 分母為接種數,分子為保護數;
      [4] PD50為半數保護,其計算法同LD50的計算。
      (四)空斑減少法
      在細胞培養上進行病毒中和試驗,近年來多采用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當濃度,使每0.2ml含80個-100個PFU(空斑形成單位),與不同稀釋度的待檢血清等量混合,置37℃作用1h-2h,分別測定PFU,使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價。見表7-4。
      表7-4 空斑減少法中和試驗示例
      注:[1] 血清用4倍遞增稀釋;
      [2] 空斑減少50%的血清稀釋度,其計算法同LD50的計算。

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