基本原理
常用于農藥殘留分析的免疫分析的技術有放射免疫分析(radioimmunoassay,RA)和酶免疫分析(enzyme immunoassay,EA)兩種。RIA創立于20世紀60年代,EIA是繼RIA之后,于20世紀70年代發展起來的一項新的免疫學技術。RIA與EIA技術一樣,由反應系統和檢測系統組成。在免疫反應系統中,RIA與EIA技術的原理基本一致,即抗原與抗體反應,形成抗原抗體復合物。但在檢測系統中,二者有本質的區別。RIA技術以放射性同位素(如251,32P,3H等)作指示劑(標記物),然后用γ射線探測儀或閃爍計數器測定γ射線或β射線的放射強度。
而在EIA技術中,用作標記物的指示劑為生物酶。酶是一種高效的生物催化劑,可與其底物發生特異性催化反應。生成的產物又可與另一種能產生顏色反應(生色源)或使紫外吸光值變化(供氫體)的化合物發生氧化還原反應。最后,用分光光度計測定底物液的吸光值,便可檢測指示劑的變化情況。
RIA技術操作過程中檢測放射性同位素需要昂貴的儀器設備和防輻射設備,并且需要專業人員,盡管RIA技術的靈敏度目前已達pg/mL水平,但它的應用前景受到限制。相對于RIA技術而言,EA技術有更多的優點,如靈敏度高、特異性強、成本低、便快速、自動化程度高、檢測方法多樣和安全等。因此,EIA技術,尤其是酶聯免疫吸附分析技術(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),已成為目前使用最普及的免疫分析技術。下面主要介紹酶免疫分析ELISA分析方法。