3. 環狀RNA的差異表達與前列腺癌的進展有關
研究者對144個前列腺癌進行了聚類分析，與線性RNA相比，環狀RNA最強模式與它們在每個樣本中的總體豐度相一致。另外，極端circRNA分布的患者的預后明顯較circRNA分布穩定的患者差，同時極端circRNA index組也與更高的轉移發生率相關。這種相關性排除了對應親本來源的線性轉錄本的影響，種種跡象表明這種特異性表達的circRNA與前列腺癌的發生發展密切相關。
為了評估這些特異性circRNA的功能重要性，選取前列腺癌細胞系中數量最多的2000個環狀RNA進行shRNA功能缺失篩選，位點靶向于反式剪切序列，然后對這些環狀RNA敲除細胞系進行全轉錄組測序，同時耗盡其中的線性RNA以保證篩選的有效性，結果表明這些特異性的circRNA對細胞的增殖產生明顯的促進作用，而不是線性RNA。
4. circCSNK1G3的功能特征
環狀RNA分子circCSNK1G3非常特殊，其環狀和線性形式表達豐度相似，經驗證發現環狀RNA形式在四種前列腺癌細胞系中是必不可少的，相反的，其對應線性轉錄本則是非必須的。為了研究circCSNK1G3促進細胞增殖的機制，研究者在PC-3細胞系中對circCSNK1G3進行敲除和過表達后進行全轉錄組測序（RNA-seq）分析。GSEA富集分析顯示過表達樣品中上調的許多基因在敲除樣品中下調，反之亦然。另外兩種環狀RNA circSTAU2和circGOLPH3也出現了類似的模式，說明在敲除和過表達實驗中觀察到的表型并不是由靶外效應引起的。同時，敲除其線性轉錄本CSNK1G3后，并沒有這種現象。最終證實circCSNK1G3對前列腺癌細胞增殖的促進作用與其對應線性轉錄本無關。
5. circCSNK1G3協同穩定miR-181b/d活性促進前列腺癌
環狀RNA通常與miRNA相互作用發揮調控功能，首先通過預測找到了10個與circCSNK1G3作用的候選miRNA，進一步分析了circCSNK1G3與miRNA之間的相關性，最終確定了與circCSNK1G3表達顯著相關的5個miRNA，分別是miR-181a/b/c/d和miR-196b。通過circCSNK1G3 pull down（云序生物提供此項服務）實驗發現只有miR-181b/d顯著富集，敲除circCSNK1G3降低miR- 181b/d豐度，過表達增加miR- 181b/d豐度。對ciRS-7也有類似的現象，敲除ciRS-7降低了其相互作用的miR-7。PC-3細胞系中miR-181b/d 過表達顯著降低CBX7豐度，CBX7是一種特征良好的miR-181b靶點，也是前列腺癌的腫瘤抑制因子。與miR-181b/d在circCSNK1G3敲低后下調一致，CBX7豐度顯著增加。同樣的，在miR-181b/d 過表達細胞系中，細胞周期基因如CDK1、CDC25A上調，而在circCSNK1G3敲除細胞系中下調。與細胞周期基因上調一致，miR-181b/d過表達可促進PC-3細胞增殖。更重要的是，miR-181b/d的過表達顯著減弱了circCSNK1G3的敲除誘導的細胞增殖阻滯。綜上所述circCSNK1G3通過與miR-181b/d的相互作用促進前列腺癌細胞的增殖，且這種新的調控方式有別于海綿機制。
總結
總結一點：有充足的經費，有充足的樣本，利用新分子circRNA做分子標志物，結合機制，登頂CNS不再遙遠。
云序生物環狀RNA平臺優勢:
環狀RNA“一站式”服務一直以來是云序生物的主打產品，嚴格的質控把關、嚴謹的實驗設計、出色的生信分析以及貼心的售后服務造就了多項世界首篇環狀RNA研究文章，受到了廣大客戶的一致好評。迄今為止，云序已經積累了超過10000例環狀RNA測序的經驗，樣本覆蓋20多個物種以及50多種疾病，客戶發表文章達20篇以上。此外云序生物提供環狀RNA系統性解決方案，從環狀RNA篩選、驗證、機制一條龍覆蓋，為科研客戶打造高分文章。
