1.實驗室檢查
（1）厭氧菌培養 傷口滲液送厭氧菌培養，可分離出肉毒梭菌。
（2）外毒素檢測 取早期患者血清培養，注入小白鼠腹腔內，另用對照小白鼠，在注射患者血清同時注入同型抗毒素。前者出現四肢癱瘓、失聲和呼吸困難，而對照組小白鼠則不出現癥狀。
（3）動物試驗 用傷口分泌物生理鹽水浸出液0.5～1ml，注入小白鼠腹腔內，亦能出現肌肉癱瘓。
（4）血、尿、腦脊液檢查 一般正常。
2.其他輔助檢查
肌電圖單次超大劑量神經刺激后，肌肉的動作電位振幅降低，有診斷價值。
