維生素B5的分析方法包括微生物法、實驗動物法、放射免疫法以及化學法。分析材料的復雜性、多樣性阻礙了化學法的發展。雛雞生長法被廣泛用于測定結合形式和游離形式的維生素B5。放免法以及白動熒光分析技術已成功地用于維生素B5測定。
維生素B5的微生物法測定法使用較廣泛，但測定前必須使維生素B5從輔酶形式中游離出來。由于方法不得當，過去用徽生物法測定的飼料中維生素B5含量的數值普遍偏低。使維生素B5從結合形式中游離出來的方法包括：
（1）用腸磷酸酶裂解磷酸鍵
（2）用鴿子或雞肝臟中的酶裂解琉基乙胺和泛酸之間的化學鍵。
不能用水解法釋放游離維生素B5，這將導致維生素的破壞。許多微生物可以用來測定維生素B5，其中胚芽乳桿菌（阿拉伯糖乳酸桿菌）應用最廣泛。