基本方案
| 實驗材料 | 冰凍切片 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | Tris·Cl EDTA 甘氨酸 PBS SSC 乙醇 甲酰胺 硫酸葡聚糖 DTT NaCl |
| 儀器、耗材 | 加濕盒 水浴鍋 培養箱 |
| 實驗步驟 |
1. 從冰箱中取出載玻片，平衡至室溫，再打開玻片盒。置載玻片于架中，浸泡于以50 mmol/l Tris·Cl（pH7.5）/5 mmol/l EDTA所配的鏈霉蛋白酶液中，放10 min。 2. 室溫下將載玻片浸于含2 mg/ml 甘氨酸的PBS中30 s，然后再于PBS中浸2次，毎次30 s。
3. 浸載玻片于新配的TEA緩沖液中5 min。
4. 在一個燒杯中，配足量TEA緩沖液以沒過載玻片。加乙酸肝至終濃度0.25%，迅速倒在載玻片上，晃動玻片架使液體充分混合，放置10 min。
6. 按順序經30%、60%、80%、95%和100%乙醇依次縵泡脫水，每次浸2 min，干燥切片并馬上用于雜交。
7. 沉淀標記的DNA或RNA探針。確定標記摻入的百分率（比活）并估計合成的探針量，并按最終每千堿基0.2 μg/ml 的濃度，估算雜交混合液的終體積，依此重懸探針沉淀。
8. 首先以2份雜交混合液B及2份去離子的甲酰胺重懸探針沉淀，隨后加1份50%硫酸葡聚糖，充分混合。
9. 標記的DNA探針煮沸2 min，馬上置于冰浴；或于80℃加熱標記的RNA探針30 s，維持于50℃。熱變性后，加3.3 mol/l DTT至50 mmol/l 終濃度。用加樣吸頭，加足量探針充分覆蓋切片。
（1）在預熱至50℃的RNA洗液1中洗15 min，至少洗2次。
（2）玻片在37℃的含20 μg/ml 經煮沸處理RNA酶A的0.5 mol/l NaCl / 10 mmol/l Tris·Cl（pH8.0）液中溫育15 min。
13. 在以下各溶液中依次浸泡脫水，每次浸泡2 min：含0.6 mol/l NaCl 的30%乙醇、含0.6 mol/l NaCl 的60%乙醇、80%乙醇、95%乙醇和100%乙醇。
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