冰凍切片神經元高爾基法染色試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
YIJI冰凍切片神經元高爾基法染色試劑是一種旨在使用親銀還原技術，分析固定處理的冰凍組織切片中神經元（neuron）、錐體細胞（pyramidal cell）、膠質細胞（glia cell）、少突觸膠質細胞（oligodendrocyte）和其它突起（process）尤其樹突（dendrites）形態學的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統方法、成功實驗證明的。主要適用于冰凍腦組織或外周神經組織切片的相關神經細胞檢測。廣泛用于動物腦神經病理生理解剖學的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。
技術背景
意大利科學家高爾基（Camillo Golgi）于1873年發明了神經細胞黑色反應的浸銀染色技術，從而開辟了神經系統形態結構、演變、單系發生、構建以及疾病等學科研究，并建立了神經學說。腦神經組織經固定，親銀染色后，呈現部分神經細胞完全染色，而其它神經細胞沒有任何著色的高度選擇性染色。
產品內容
YIJI固著液（Reagent A） 毫升
YIJI氧化液（Reagent B） 毫升
YIJI營養液（Reagent C） 毫升
YIJI強化液（Reagent D） 毫升
YIJI脫水液（Reagent E） 毫升
YIJI清理液（Reagent F） 毫升
YIJI染色液（Reagent G） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證3月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
無菌手術刀和鑷子：用于解剖動物腦組織
小型玻璃染色缸或60毫米玻璃培養皿：用于組織切片處理的容器
火棉膠（collodion）：用于保護固著處理后的組織樣品
切片機：用于組織切片
明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片
中性樹脂：用于切片封片
光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析
實驗步驟
樣本固著處理
常規麻醉動物和手術（建議：使用生理鹽水由心臟處灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）
使用適量的YIJI固著液（Reagent A）灌注處理
即刻小心取出腦組織
小心放進到xx毫升YIJI固著液（Reagent A）里
室溫下浸泡孵育1小時
用無菌手術刀將腦組織切成0.5厘米厚的組織塊
即刻用無菌鑷子夾起組織塊
小心轉移到xx毫升YIJI氧化液（Reagent B）里（20毫升/2塊組織塊）
室溫下浸泡孵育2周，避免光照
小心轉移到xx毫升YIJI營養液（Reagent C）里
室溫下浸泡孵育48小時，避免光照
小心轉移到xx毫升YIJI強化液（Reagent D）里
室溫下浸泡孵育48小時，避免光照（注意：可以孵育1周）
用綿紙吸干組織快
使用30％蔗糖處理、OCT包埋或使用用戶自備的火棉膠（8％collodion）包埋
放進－20℃冰箱里
取出組織塊，在－20℃條件下進行緩慢冰凍切片，為20至100微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上
置于－20℃冰箱里保存
樣本染色處理
取出待測的20至100微米厚的冰凍組織切片
小心加上xx微升YIJI脫水液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個樣品表面
室溫下孵育2分鐘
小心移去切片上的YIJI脫水液（Reagent E）
重復實驗步驟2至4一次
室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
室溫下孵育48小時，直至呈現黑色，即刻終止，避免光照（注意：期間可以在顯微鏡下觀察；避免干化）
小心移去切片上的YIJI染色液（Reagent G）
室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
（選擇步驟）進行復染操作（建議使用YIJI甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）復染試劑盒－YIJI80052）
透明處理
放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
即刻在一般光學顯微鏡下觀察：神經元、錐體細胞、膠質細胞、少突觸膠質細胞（橢圓形如同串珠）和其它突起，呈現黑色（如果復染――細胞核呈現藍色，胞漿尼氏（體）物質呈現粉紅至紫色）
注意事項
本產品為20次操作
操作時，須戴手套
鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片：第一用毛筆涂刷；第二保持濕潤3小時；第三用PARAFIN包裹后壓片
切片建議100至200微米，過厚和過薄不利于檢測神經細胞
有的組織采用冰凍切片易破碎，建議第一調整切片溫度；第二切片厚度在150微米以上；如果無法解決，建議使用石蠟切片等
建議使用玻璃染色缸
每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
整個操作，在避光狀態下進行
染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
樣品染色后保存，避免光照
本公司提供系列組織細胞神經系統成分染色試劑產品
質量標準
本產品經鑒定性能穩定
本產品經鑒定顯色清晰