分配色譜儀填充柱是填充了固定相(載體和固定液)的色譜柱。
一、柱管選擇:
1、柱管材質:
常用的填充柱有玻璃管柱、金屬管柱和塑料管柱。
(1)玻璃管柱:
1)材質:硼硅玻璃。
2)特點:化學惰性好,柱效高,易碎。
3)使用事項:使用時等柱冷卻后才能停止通載氣。
4)應用:適用于強極性化合物的分離。
(2)金屬管柱:
1)材質:主要為不銹鋼。
2)特點:不易損壞,看不見柱內。
3)使用事項:使用前用布擦凈內壁,再用10%熱過氧化氫溶液浸泡,最后用水沖洗至中性。
4)應用:適用于脂肪酸酯和烴類化合物的分離。
(3)塑料管柱:
1)材質:多為聚四氟乙烯。
2)特點:化學惰性好,柱效不高。
3)使用事項:最高使用溫度不超過260℃。
4)應用:適用于其它填充柱不好分離的樣品分離,如HCl和Cl2等。
2、柱管尺寸:
柱管尺寸規格多,以適應不同樣品分離目的、載體粒度、載氣流量和儀器的要求。
分析柱外徑有3.18mm、4.76mm和6.35mm;前兩種內徑為2mm,后一種內徑為2mm、3mm和4mm;柱長多在3m以內;柱形有U形和螺旋形,U形柱柱效較高,螺旋柱的螺管直徑比柱內徑大15倍才可獲得較好柱效。
柱內徑越小,應填裝粒度更小的固定相,才可獲得更高的柱效。但柱容量隨之減小,柱壓降隨之增大。
填充柱尺寸與載體粒度、載氣流量的關系如下:
(1)柱內徑2mm:
1)載體粒度:柱長<3m時為100~120目,柱長>3m時為80~100目。
2)載氣流量:N2為8~15mL/min,H2為15~30mL/min。
(2)柱內徑3mm:
1)載體粒度:柱長<3m時為100~120目,柱長>3m時為80~100目。
2)載氣流量:N2為15~30L/min,H2為30~60mL/min。
(3)柱內徑4mm:
1)載體粒度:柱長<3m時為80~100目,柱長>3m時為60~80目。
2)載氣流量:N2為30~60L/min,H2為60~100mL/min。
二、固定相制備:
制備液體固定相時,將適量的固定液均勻地涂在載體表面上,使之能很好的分散,同時覆蓋載體表面活性點。制備時溶解固定液的溶劑體積不宜過大,以能潤濕載體為宜;溶劑沸點不宜過高,以免溶劑揮發時造成固定液損失;溶劑化學性質要穩定,不與固定液發生任何作用。
三、柱填充:
1、填充要求:
(1)固定相要均勻、緊密,減少空隙和死空間。
(2)填充時不得敲打過猛,以免造成載體破碎,致使柱性能變差。
2、柱填充方法:
(1)多采用抽空裝柱,即將柱出口接上真空泵抽氣,固定相從入口傾入,還可接CaCl2或硅膠干燥塔以防潮濕空氣進人。
(2)沸點較低的固定相不宜采用抽空裝柱,一般采用邊裝邊敲打的手工法裝柱。
(3)以聚四氟乙烯作載體的固定相,需將固定相冷凍12h,然后在0℃條件下填充到色譜柱中。色譜柱的濕氣要預先用干燥氣體置換,以免色譜柱結冰,固定相結塊。
四、柱老化:
1、柱老化目的:
除去柱內剩余的溶液、固定液的低沸點餾分和易揮發的雜質,使固定液更均勻地分布在載體和管壁上。
2、柱老化方法:
柱老化多采用氣體流動法,即將柱人口與進樣室相接,出口不接檢測器,通以載氣,以2~4℃/min的速度程序升溫至低于固定液zui高使用溫度20~30℃,老化12~24h。當基線平穩后,老化合格。