該方法是中華人民共和國衛生部頻布的“關于全國腸出血性大腸桿菌O157：H7感染性腹瀉應急處理預案”中的指定方法。
將樣品經過特殊的前增菌及增菌后，取120ul的增菌培養液放入試紙夾的樣品槽中，樣品由于毛細管作用移至反應區，反應區中含有特殊的抗體(E.coliO157:H7抗體)它與膠體金顆粒共軛偶聯。如果樣品中存在抗原，將同金標抗體結合形成抗原-抗體復合物，沿著硝酸纖維素膜向前移動至含有固定的抗E.coliO157:H7抗體區域(T區)，金標免疫的復合物與該區域的抗抗體發生特異性結合形成一條可見的線。其它的樣品繼續移動到膜的未端，最終進入廢物池被遺棄。
反應區也含有金標結合的一種ZL抗原(顏色指示劑)，不管樣品中有沒有E.coliO157:H7抗原，它都被樣品洗脫。金標控制指示劑通過膜移動到陰性控制區與ZL抗體結合形成一條可見的線。無論樣品中有沒有E.coliO157:H7抗原，控制線都將在控制區(C區)形成，來確保試驗正常進行。
增菌液滴入8-10分鐘后，觀察試紙C區和T區有無明顯的線。在C和T區都有可見的線，則結果為陽性。C區有線、T區無線，則結果為陰性。如C區無線，無論T區有沒有線，則實驗無效。