大鼠主動脈平滑肌細胞培養可用于:(1)獲得大鼠主動脈平滑肌細胞;(2)用于血管疾病研究;(3)用于動脈疾病研究。
| 實驗方法原理 | 運用組織塊貼壁法進行SD大鼠胸主動脈平滑肌細胞培養,并用倒置相差顯微鏡觀察、HE染色后形態學觀察以及用免疫組化對培養細胞進行鑒定。 |
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| 實驗材料 | SD大鼠 |
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| 試劑、試劑盒 | PBSFBSDMEM |
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| 儀器、耗材 | 手術剪手術鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術刀培養皿 |
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| 實驗步驟 | 一、實驗步驟
1. SD 大鼠(150-200 g),斷頭,浸入75%的酒精中15 min。 2. 置入超凈臺中,將大鼠固定于殺鼠板上,在無菌條件下打開腹腔,分離出胸主動脈、腹主動脈, 摘出。
3. PBS 清洗3 遍,剝去外膜,用手術刀片刮去內膜,留下中膜并將其移入1 mL 的培基中、剪成1x1 mm2 大小組織塊。
4. 再將PBS清洗組織塊,移入25 mL 的培養瓶中,用尖嘴彎管均勻貼好組織塊,放入37℃、5% CO2的培養箱倒置培養6 小時后,待組織塊貼壁后,再加入2.5 mL 培養液后放回培養箱中。
5. 隨后每3 天予以全量換液。
二、結果
3-5 天后可見組織塊周圍有細胞爬出,大約2 周后80-90%融合。 展開 |
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| 注意事項 | 第四步中最后加入2 mL 培養液時應使其順無組織塊的皿邊緣緩慢流下,勿使組織塊吹下。 |
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