如何選擇高效液相色譜用溶劑

　　高效液相色譜用溶劑分為流動相用溶劑和空白溶劑。選擇的溶劑一般應具有低粘度、高純度、化學穩定性好對樣品有合適的極性和良好的選擇性、與檢測器兼容性強、低毒等特征。

　　流動相溶劑的選擇沒有一定的模式，更多的來源于經驗的積累，但溶劑的極性和理化性質可以作為重要的選擇依據。流動相所用溶劑一般為二元或多元溶劑，以便于靈活調節流動相的極性和增加選擇性，以改進分離和調整出峰時間。選擇溶解樣品的空白溶劑時一般要綜合考慮到樣品的極性和溶解度、溶劑的洗脫強度和組成、進樣量等因素進而選擇合適的溶劑，為了選擇的簡便性的同時避免溶劑效應的產生，一般選擇同流動相所選溶劑一致或相似。

　　低粘度

　　粘度過高會影響溶質的擴散增大柱壓、降低柱效，延長分離時間，不利于色譜峰的分離。但粘度過于低的溶劑也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它們易在色譜柱或檢測器內形成氣泡，影響泵的工作，不利于色譜柱的分離效果。同時色譜峰的塔板數與流動相溶劑的粘度成反比，粘度越大理論塔板數越低。而粘度與沸點密切相關，通常選用沸點高于柱溫20～50℃但低于100℃，粘度不大于5×10-4Pa.S的溶劑作為高效液相色譜用溶劑。

　　高純度

　　由于高效液相靈敏度高，對溶劑的純度也要求高。不純的溶劑會引起基線不穩，或產生“偽峰”。痕量雜質的存在，即可使截止波長值大幅增加。同時色譜柱的壽命與溶劑純度也有關，當含有大量雜質的溶劑流過色譜柱，雜質富集在色譜上極易造成色譜柱的堵塞。液相所用溶劑應盡量達到HPLC級，理論上完全由HPLC級溶劑組成的流動相不必過濾，但考慮到溶劑中溶解有氣體，在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低產生氣泡，若富集于檢測池中會增大基線噪音，嚴重時會造成分析靈敏度下降。溶劑中溶解的氧氣也會導致某些組分或色譜柱的固定相發生降解而改變柱的分離性能。同時溶劑在存儲分裝過程中會引入部分雜質，建議即使是HPLC級的溶劑亦需要進行過濾處理。

　　具有良好的化學穩定性，對樣品有合適的極性和良好的選擇性

　　溶劑不能與樣品發生反應或聚合，一般的選擇原則為相似相容原則即極性大的試樣用極性強的洗脫劑，極性弱的試樣用極性弱的洗脫劑。所選溶劑亦不得改變色譜柱填料的任何性質。如低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料遇到部分有機溶劑會溶脹或收縮，改變色譜柱的性質。正相色譜分配中流動相的極性小于固定相的極性以利于極性化合物的分離；反向分配色譜中流動相的極性大于固定相的極性以利于非極性化合物的分離。對樣品的溶解度要適宜，如果溶解度欠佳，樣品可能會在柱頭析出富集，不但會影響色譜峰的分離，也會損壞色譜柱，堵塞儀器管路。在一般的色譜分析中我們用到的溶劑多為二元溶劑或多元溶劑，溶劑的最終極性是通過混合溶劑的比例進行調節的，改變溶劑的極性，增加溶劑的選擇性，進而改善分離和出峰時間。當樣品用非流動相溶解時，如果樣品的洗脫強度比流動相弱，可適當加大進樣體積，一般對峰寬和分離度無不良影響。但有時為了完成樣品的溶解性，會用強洗脫能力的溶劑溶解樣品，樣品溶劑可看為流動相的一部分，溶解在其中的樣品在其帶動下在色譜柱快速遷移，而部分樣品同時會溶解在流動相中，產生溶劑效應，使峰變寬分叉，部分析出的樣品會堵塞色譜柱和儀器管路，造成分析方法準確度下降。在選用強洗脫能力的溶劑溶解樣品時要適當降低進樣量，以避免溶劑效應的產生。我們選擇樣品溶劑的一般原則為首選流動相，如流動相中含有大量的鹽，一般會選擇有機相比例小于等于去除緩沖鹽的起始流動相體系。

　　與檢測器匹配

　　對于紫外檢測器，需要考慮溶劑在紫外波段的吸收，所用的溶劑的截止波長應小于檢測波長，保證在所選擇的檢測波長下，溶劑無吸收或者吸收較小。對于示差檢測器，需要考慮溶劑的折射率，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相，以達最高靈敏度。

　　附常用溶劑性質