你這個結論并不對。兩步法,三步法并沒有本質區別,信號的讀取都是在每一個延長結束后讀取。定量PCR一開始的時候也是三步法的。兩步法,是因為設計引物的時候把退火溫度設為酶的工作溫度,而且定量PCR的產物都很短,需要的時候都短,所以兩步法更方便。三步法的話,花的時間長,不利于快速實驗。