對于禽流感檢測樣本的獲得和前處理推薦的方法

對于禽流感檢測樣本的獲得和前處理推薦的方法

對于禽流感檢測樣本的獲得和前處理，可以參照國家標準“高致病性禽流感診斷技術（GB/T 18936-2003）”推薦的方法進行，具體為：

【病料的采集】死禽采集氣管、脾、肺、肝、腎和腦等組織樣品，進行分別處理或者同時處理；活禽病料應包括氣管或泄殖腔拭子，尤其以采集氣管拭子更好；小珍禽用拭子取樣易造成損傷，可采集新鮮新鮮糞便。

【病料的保存】病料應放在含有抗菌素的pH值7.0～7.4的等滲磷酸鹽緩沖液（PBS）內（無PBS可用25％～50％的甘油鹽水）。抗生素的選擇視當地情況而定，組織和氣管拭子懸液中應含有青霉素（2000IU/ml）、鏈霉素（2mg/ml）、慶大霉素（50μg/ml）和制霉菌素（1000IU/ml），但糞便和泄殖腔拭子所有的抗生素濃度應提高5倍，加入抗生素后pH值應調至7.0～7.4。在室溫放置1h～2h后樣品應盡快處理，沒有條件的可在4℃存放幾天，也可于低溫條件下保存（-70℃貯存）。

【病料的處理】將棉拭子充分捻動、擰干后棄去拭子；糞便、研碎的組織用含抗生素的pH值7.0～7.4的等滲PBS溶液配成10％～20％（g/ml）的懸液，樣品液經1000r/min離心10min，取上清液作為實驗材料。

【病料保存樣本保存和運送的一般原則是什么】

一般性原則：采集和運輸：

標本采集用材料，如棉簽和拭子都應一次性使用，所使用的抗腐劑和抗凝劑不應對樣本和擴增反應有降解或抑制作用。

對于RNA樣本，要特別注意混入操作人員的毛發、表皮細胞和痰液。

對于DNA樣本的運送：可在室溫下運送，建議在8小時內完成，對RNA，10分鐘內的運輸可在室溫進行，超過此時間，必須加冰運輸，既便低溫，一般亦不得超過4小時。

標本的保存：對DNA：2℃－8℃可穩定放置3天，RNA一律－20℃保存。

主要的擴增反應抑制物質：血樣中用于抗凝的肝素，可以枸櫞酸鈉或EDTA-K3替代；血紅蛋白、乳鐵蛋白

【口腔棉簽拭子和瀉殖腔樣品如何保存】

口腔棉簽拭子和瀉殖腔樣本一般不單獨保存，在取樣后，應盡快將其放入含PBS緩沖液（有時要加入抗生素）的離心管充分捻動，擰干后立即進行處理和使用，不立即使用時，推薦-70℃低溫保存。如果暫時不處理，也可將拭子留于離心管中低溫保存。