數十年來，國際血液學標準化委員會（ICSH）先后推薦了血紅蛋白測定（J Clin Pathol,1996年），血細胞壓積（J Clin Pathol,1980年）和紅細胞、白細胞計數（Clin Lab Haematol,1994年）的參考方法。由于種種原因，血小板計數的參考方法直到2001年才正式公布，成為傳統CBC計數 校準、確定血液分析儀校準品靶值的可靠依據（Am J Clin Pathol,2001年）。現將ICSH有關血小板計數的參考方法介紹如下。
一、血小板計數參考方法
ICSH曾經推薦過數種血小板計數的侯選方法，如（1）以草酸銨稀釋-相差顯 微鏡法計數血小板；（2）電阻抗法測定RBC/PLT比率。但是，這些方法很難成為準確的、精確的、可靠的血小板計數參考方法， 原因有二：（1）血小板很難與細胞碎片、背景噪音鑒別；（2）大量紅細胞會干擾血小板計數。
隨著流式細胞儀普及應用，使血小板直接計數成為可能。一系列血小板標志物（包 括靜息或激活），如抗CD42，CD41，CD61等單抗，可以標記循環血液中所有血小板，包括獨立血小板，黏附于紅細胞的血小 板，黏附于白細胞的血小板等，通過恰當稀釋，運用流式細胞術能很好將血小板群體分離出來，為準確計數血小板成為可能。
ICSH推薦的間接血小板計數，即采用流式細胞儀計數PLT與RBC相對數量 ，同時采用半自動、單通道、電阻抗顆粒計數儀準確計數紅細胞，通過準確和精確的方法，可以確定血液中血小板數量。
（一）、方法學原理
無菌緩沖液預稀釋的EDTA抗凝全血，用特異性熒光標記單克隆抗體染色血小板 。溶液中被染色的血小板稀釋成計數濃度，在流式細胞儀上根據熒光強度和散射光計數PLT和RBC。通過RBC/PLT比率測定值 ，和準確的RBC計數值就可得出準確的血小板計數值。
（二）、血液標本
EDTA抗凝的新鮮靜脈血液標本（3.7-5.4μmol/ml血液），即K 2EDTA（分子量368.4）濃度為1.4-2.0mg/ml血，K3EDTA（分子量442.5）濃度為1.6-2.4mg /ml血。若需同時測定HCT和MCV值，推薦采用K2EDTA抗凝血。標本放置于室溫（18-22℃），4小時內處理完畢。
（三）、玻璃器皿
貯存或稀釋標本用的容器避免發生血小板黏附，不能采用平底玻璃器皿。推薦采用 聚丙烯或聚苯乙烯材料制成的容器。
（四）、儀器性能
對于紅細胞計數和血小板計數，采用能測量前向散射光和熒光的流式細胞儀。儀器 必須有足夠的敏感度來分析FITC標記的、直徑2μm球形顆粒的散射光和熒光。
對于全血紅細胞計數，采用半自動、單通道、電阻抗顆粒計數儀。儀器測量孔必須 直徑80-100μm，長度是直徑的70%-100%。容積誤差1%以內，并可溯源到國家或國際標準。
（五）、試劑
1、稀釋液：0.01mol/lPBS，pH7.2-7.4，含1%小牛血清 （BSA）。
2、染色液：FITC直接標記的能識別血小板GPIIb/IIIa復合物2種 表位的單抗：CD41和CD61。商品FITC標記抗血小板抗體有：抗CD61（clone RUU-PL7F12，Becton Dickinson公司）和抗CD41（clone P2，Beckman Coulter公司）。推薦采用雙標記染色法.