應用固相萃取（二）

3.3 樣品的前處理

3.3.1 提取劑的選擇

飼料組成極為復雜，對磺胺類藥物的提取和測定干擾較大。在本研究中，考察了甲醇、70%酸性甲醇、乙睛和95%乙睛水四種提取劑的提取效果及對測定的影響。結果如圖所示。

由圖可知以甲醇和70％的酸性甲醇為提取劑時，色譜圖基線不平，可能影響樣品的測定。而95%乙

睛水對堿性氧化鋁小柱具有穿透作用，使得目標分析物流失。因此，選擇乙睛作為提取劑。

3.3.2 堿性氧化鋁小柱飽和容量

考察了氧化鋁小柱的最大飽和容量，將標準溶液10μg/mL分別上柱2 mL、5 mL、10 mL、20 mL、30  mL，結果如表3所示。由表中結果可知，堿性氧化鋁小柱對磺胺類藥物的承載量小于200μg。而磺胺類藥物在配合料中的添加量約為100～200mg/kg，在添加劑預混合飼料中大于1000mg/kg，在稱樣量為2g時，配合飼料上樣量定為10mL；添加劑預混合飼料上樣量定為2mL。

表3 堿性氧化鋁SPE小柱穿透性結果—下滴液中SAs百分率

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3.3.3 洗脫劑的選擇

考察了75%乙睛水、25%乙睛水和純水三種洗脫液，每次用2mL洗脫液，洗脫3次，結果見表4。由表中結果可知，75%的乙睛水洗三次后仍有個別磺胺類藥物未被洗脫；而25%乙睛水、純水在三次洗脫后，洗脫液中已無任何磺胺類藥物。由于25%的乙睛水恰恰是流動相的組成，因此確定用25%的乙睛水2mL洗脫兩次

表4 洗脫劑的選擇—不同洗脫劑分次洗脫百分率（%）（100ng標準溶液）

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3.4 樣品的測定

將該方法用于雞配合飼料和豬配合飼料中磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉等五種磺胺類藥物的測定。考察了20μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL濃度水平加標回收，回收率結果見表5。在雞配合飼料中，四個濃度水平的磺胺類藥物的回收率高于77.7%，RSD≤；在豬配合飼料中，四個濃度水平的磺胺類藥物的回收率高于80.2%，RSD≤；由于在豬濃縮飼料中磺胺類藥物添加量較高，因此只考察了一個濃度水平的回收率，結果見表6。

表5（1） 雞配合飼料中五種磺胺類藥物的回收率

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表5（2） 豬配合飼料中五種磺胺類藥物的回收率

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表6 豬濃縮飼料中磺胺類藥物的回收率

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4 結論

高效液相色譜法測定飼料中磺胺類藥物，方法簡單、易于操作，準確度、精密度均符合要求。該方法適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混合飼料中磺胺類藥物的檢驗。

5參考文獻

1  GB/T19542-2004“飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的測定 高效液相色譜法”；

2  NY5029-2001 無公害食品 豬肉 附錄E 磺胺類藥物在動物可食性組織中的高效液相色譜檢驗；

3  Kristof E.Maudens, Quantitative  analysis of twelve sulfonamides in honey after acidic hydrolysis by  high-performance liquid chromatography with post-column derivatization  and fluorescence detection. Journal of Chromatography A,1047(2004) 85-92

4 John D. Weber, liquid chromatography determination of sulfamethazine in milk ,J.ASSOC.OFF.ANAL.CHEM(VOL.72,NO.3,1989)

5 Joe O.Boison  ,Determination of Sulfadimethoxine and Sulfamethazine Residues in animal  tissues by liquid chromatography and thermospray Mass spectrometry ,  Journal of AOAC, VOL 78,NO.3, 1995