應用FLIPR鉀離子通道檢測試劑盒對hERG通道阻斷...（二）

應用FLIPR 鉀離子通道檢測試劑盒對hERG通道阻斷劑特性的分析

電生理實驗

為便于結果比較，所有同樣的hERG 通道阻斷劑均在IonWorks Barracuda1 全自動膜片鉗系統進行了檢測得到相應的IC₅₀ 值（圖4）。為觀察化合物的頻率依賴性效應，電壓刺激命令均以0.1Hz 頻率在加樣前后分別刺激5 次。第五個電流信號記錄的sweep 中hERG 尾電流峰值被用來測定化合物效應。

結果

應用FLIPR鉀通道檢測試劑盒對七個已知的hERG 阻斷劑的效應進行評估。量效反應曲線見圖5。IC₅₀ 值與IonWorks Barracuda 全自動膜片鉗系統檢測的IC₅₀的比較見表1 兩者具有很好的相關性。

另外，其中3 個化合物被用于評估比較另一種基于鉈離子的試劑盒——FluxOR 鉀離子通道試劑盒（圖6）。兩者所得到的IC₅₀ 值很接近，具體見表2。然而，FLIPR 鉀離子通道檢測試劑盒的信號窗口是的2.25（基于信號與基線的比例），這一數值顯著高于FluxOR（信號窗口是0.5）。表明了FLIPR 鉀離子通道檢測試劑盒的實驗結果更精確、更可靠。陰性對照是4μM 特非那定對hERG通道的阻斷效應，陽性對照是刺激性緩沖液對hERG 通道的效應。更低的空間差異和更大的信號窗口產生了更大的Z因子值，見圖7。這可能源于FLIPR 鉀離子通道檢測試劑盒是真正的均相實驗體系且是免洗的或無需更換培養基，從而顯著減小了孔間差異性。

結論

FLIPR鉀離子通道檢測試劑盒 采用均相 免洗 的實驗方案檢測鉀離子通道功能活性。 在本文中，我們應用 了 hERG通道陽性抑制劑驗證了 FLIPR鉀離子通道檢測試劑盒和電生理方法得到的結果是高度相關。

在另個單獨運行的實驗中， 相比于其它同類型試劑盒來說， FLIPR鉀離子通道檢測試劑盒 表現出了顯著性更高的 信號窗口以及Z因子值。 明顯提升的實驗 結果表現 ，結合 FLIPR^Tetra系統的高通量性能，在 藥物研發早期階段將為究者提供一種強大的 hERG風險評估分析平臺。