總黃酮的提取和測定

實驗原理

黃酮類化合物是植物的重要次生代謝產物，也是一些保健品和中藥材的有效成分之一。黃酮類化合物的定量方法常用的有 HPLC法和分光光度法，在實際生產和科研過程中，對于黃酮單體的定量常采用HPLC法，而對總黃酮的測定，考慮到方法的簡便、快捷以及可行性，多采用在堿性介質中加鋁鹽顯色的分光光度法。在堿性條件下黃酮類化合物與鋁鹽形成絡合物、在500nm波長處有最大吸收峰。標準品選用蘆丁。

試劑和器材

一、試劑

蘆丁標準品。

5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。

二、材料

新鮮銀杏葉。

三、器材

容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管 0.5ml（×2），1ml（×2），2ml（×1），5ml（×1）；分光光度計。

操作方法

一、制作標準曲線

精密稱取蘆丁標準品5mg，用70％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，搖勻，得0．2mg／mL的標準溶液。

精確吸取標準溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分別置于10mL容量瓶中，加入 5％NaNO2 0.4mL，搖勻，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，搖勻，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min。以試劑空白作為參比溶液。用1cm比色皿，在500nm波長處測定吸光度，繪制標準曲線。

二、總黃酮的提取

把新鮮的銀杏葉低溫烘干，使水分小于8％，制成干粉。精確稱取干粉1．0g，置于 100mL容量瓶中，加入70％乙醇30mL，浸泡24h。超聲波提取30min，過濾，濾液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中，得到黃酮提取液，待用。

三、測定

吸取黃酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO3 0.4mL，搖勻，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，搖勻，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min。以試劑空白作為參比溶液。用1cm比色皿，在500nm波長處測定吸光度，由標準曲線法計算總黃酮含量。

注意事項

對于某些熱敏成分的提取，采用超聲波破碎法效果較為理想。由于此過程是一個物理過程，浸提過程中無化學反應，被浸提的生物活性物質在一定時間內保持不變。