抑郁模型大鼠不同部位 miR－16表達及其與 5－羥色胺轉運體的關聯性研究
摘 要 目的 研究 miＲ － 16 在慢性不可預知溫和應激抑郁癥模型大鼠神經系統不同部位的表達及其與 5 － 羥色胺( 5 －HT) 轉運體的關聯性。方法 對照組和慢性不可預知溫和應激抑郁模型組大鼠各 10 只，模型組大鼠接受 21 天的不可預知溫和應激刺激，對照組大鼠正常飼養。兩組大鼠麻醉后收集腦脊液，測定 miＲ － 16。然后斷頭處死，分離前額葉皮質、中縫核、海馬，測定 miＲ － 16 和 5 － HT 轉運體蛋白。結果 模型組大鼠腦脊液和中縫核的 miＲ － 16 相對表達量低于對照組，中縫核 miＲ － 16與 5 － HT 胺轉運體呈負相關; 而前額葉皮質和海馬中的 miＲ － 16、5 － HT 轉運體分別與對照組比較，差異均無統計學意義( P ＞0. 05) 。結論 中縫核 miＲ － 16 可能通過調節 5 － HT 轉運體的表達，參與抑郁癥的病理過程，腦脊液 miＲ － 16 亦可能與抑郁癥相關。
關鍵詞 慢性不可預知溫和應激抑郁模型;miＲ － 16;5 － HT;轉運體
世界衛生組織公布，抑郁癥已成為世界第 4 大疾患，預計到 2020 年，可能成為僅次于冠心病的第 2 大疾病。抑郁癥具有患病率高( 終生患病率女性為10% ～ 25% 、男性為 5% ～ 12% ) 、復發率高 ( 1 年30% ，5 年 70% ) 、自殺率高( 10% ～ 25% ) 等特點，是全球性公共衛生問題之一，給個人、家庭和社會帶來極大的精神損失和巨大的經濟負擔。然而，其病因和發病機制尚未清楚，給該病的診斷和治療帶來極大困難。microＲNAs( miＲNAs) 是近年來表觀遺傳學研究的熱點，是一類進化保守的、18 ～ 25 個核苷酸的非編碼 ＲNA 分子，通過與靶基因的 mＲNA 3'非翻譯區( 3' － untranslated region，UTＲ) 結合，引起 mＲNA的降解或者翻譯的抑制，從而調節蛋白表達，在生物發育和疾病發生、發展中起重要作用。現有的研究揭示，miＲ － 16 可能與抑郁癥相關，其參與抑郁癥的機制，可能是其在腦組織中以 5 － 羥色胺( 5 － HT)轉運體( serotonin transporter，SEＲT) 基因作為靶基因，參與 SEＲT 翻譯水平的調控，從而影響腦組織內5 － HT 神經遞質功能發揮。但至今尚未明確神經系統中的哪些部位參與抑郁癥的發病。本實驗通過建立大鼠慢性不可預知溫和應激抑郁模型，比較抑郁模型組和對照組 miＲ － 16 在不同部位( 腦脊液、前額葉皮質、海馬、中縫核) 的差異，以及分析 miＲ － 16與 SEＲT 蛋白的相關性，旨在探明 miＲ － 16 參與抑郁癥的作用部位及其機制，為弄清抑郁癥的發病機制以及尋找合適的生物學標志物提供參考。
材料與方法
1． 實驗動物及分組: 清潔級雌性 SD 大鼠 20 只，購自浙江省醫學科學院，實驗動物合格證號: SCXK( 浙) 2008 － 0033，體重約 150g，隨機分成對照組( 10 只) 和抑郁模型組( 10 只) 。飼養室溫度 23 ± 1℃ ，相對濕度 55% ± 5% 。
2． 抑郁模型建立: 慢性不可預知溫和應激( chronic unpre-dictable mild stress，CUMS) 模型組大鼠每天隨機接受以下刺激中 的 1 種: 4℃ 冰 水 浴5min、禁 水 24h、晝 夜 跌 倒、懸 尾10min、45℃ 高溫 5min、禁食 48h、鼠籠傾斜 24h、潮濕墊料 24h、夾尾 1min、束縛應激 2h，連續 3 周。對照組大鼠每天 12h 明亮( 8: 00 ～ 20: 00) 、12h 黑暗( 20: 00 ～ 8: 00) ，自由攝食飲水。
3． 抑郁行為評定: 采用糖水消耗實驗和曠場實驗評定抑郁樣行為。
(1) 糖水消耗實驗: 造模前和造模后各 1 次，分 3天完成，第 1 天將大鼠單籠飼養，給予 2 瓶 1% 的蔗糖水; 第 2天，將其中 1 瓶蔗糖水換成自來水，進行蔗糖水偏好訓練。第3 天，大鼠禁水 23h 后，給予 1 瓶 1% 蔗糖水和 1 瓶自來水，計算 1h 內蔗糖水和自來水消耗量，進行糖水偏好率測定。糖水偏好率( % ) = 糖水消耗量/( 糖水消耗量 + 自來水消耗量) ×100% 。
(2) 曠場實驗: 長寬高分別 100cm、100cm 和 40cm 的容器（上海欣軟提供），底部等分為面積相等的 25 格，內壁為黑色，容器正上方放置一個攝像頭，將單只大鼠放入中央，紀錄 3min 內的行走得分與垂直得分( 行走得分: 大鼠 3 只爪子進入 1 個格子計 1分; 垂直得分: 大鼠前爪離地或攀附桶壁 1 次計 1 分) 。曠場試驗固定在 18: 00 ～ 19: 00 時進行，安靜黑暗環境，并每次都清理大鼠排泄物，去除可能留下的味道。每只大鼠造模前與造模后共進行 2 次曠場試驗。
4． 腦脊液、前額葉皮質、海馬、中縫核組織的取材: 抑郁行為學指標測定后，在大鼠麻醉后，頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒，用手術刀沿縱軸切一縱行切口( 約 2cm) 用剪刀鈍性分離頸部背側肌肉。為避免出血，最深層附著在骨上的肌肉用手術刀背刮開，暴露出枕骨大孔，由枕骨大孔進針直接抽取腦脊液。斷頭處死大鼠，按包新民等的大鼠腦立體定位圖譜，在冰上迅速分離前額葉皮質、海馬和中縫核。