4、磺酰羅丹明染色法
試驗原理：SRB是一種蛋白質結合染料，粉紅色，可溶于水。 SRB可與生物大分子中的堿性氨基酸結合。其在515 nm波長的OD讀數與細胞數呈良好的線性關系。故可用作細胞數的定量。MTT法的一個缺點是OD值可隨放置時間而變，而SRB法無此現象。因此更適用于進行大規模的試驗。
方法要點： 用10%冷三氯乙酸與4℃固定已經受試樣品處理的細胞1h，洗滌，干燥；加入4mg/ml SRB液100微升/孔 染色15min，1%冰醋酸洗滌，干燥；最后加入150微升/孔 的Tris溶液，在酶標儀上與515nm波長處檢測OD值。
觀測指標 同MTT法。另外，NCI目前采用以下指標評價化合物的體外抗腫瘤活性。測定的OD值包括對照組、加藥組及加藥時的細胞的OD值C、T、和T0。據此計算：
生長抑制率（%）=（T－T0）/（C—T0）×100% ；細胞死亡率（%）=（T—T0）/ T0 ×100% 。
按生長抑制率或細胞死亡率對樣品濃度繪出量效關系曲線圖，并求出：
GI50，即生長抑制率為50%時的樣品濃度；
TGI，即生長抑制率為100%時的樣品濃度：
LC50，即細胞死亡率為50%時的樣品濃度。
5、集落形成法
試驗原理：克隆原細胞具有持續增殖能力，當單個細胞分裂6代或6代以上時，其后代所組成的群體(集落)便含50個以上細胞。通過集落計數可對克隆原細胞作定量分析。它反映了單個細胞的增殖潛力，故能較靈敏地測定抗癌藥的活性，日前被認為是一種較理想的檢測方法。
方法要點：將濃度為500個細胞/ml的對數生長期細胞懸液2ml種至35ml的培養皿，并加受試樣品適量，培養7d或更長時間，姬姆薩染色，解剖顯微鏡下計數含50細胞以上的集落。
觀測指標：根據集落數計算集落形成率，對照組集落形成率不應低于40%，再計算用藥組的集落形成抑制率，根據情況可進一步采用Logit法計算受試樣品的IC50值。
集落形成率=集落數/細胞接種數X100%
集落形成抑制率=（1-用藥組集落形成率）/對照組集落形成率X100%
6、生長曲線測定法
試驗原理：在最適條件下，腫瘤細胞在培養液中呈指數生長，如取細胞數的對數與培養時間作圖可得一條直線，故稱此時為對數生長期。隨著細胞密度不斷增高，由于代謝產物的積聚及營養物的消耗，細胞生長逐漸減慢以致停止，此時稱高坪期或穩定期。因此藥物對細胞生長的影響可通過生長曲線反映出來 。
方法要點： 將濃度為10000個細胞/ml的對數生長期細胞懸液按每瓶5ml種至25ml的培養瓶，或按每孔100微升種至96孔板，并加受試樣品適量，培養后分別于即刻和1、2、3、4、5、6、7d進行檢測。前者可采用臺盼藍染色計數活細胞，后者可采用MTT法或SRB法讀取OD值，并據此進行作圖與計算。
觀測指標 1、倍增時間(TD),將實際生在曲線進行直線回歸求出0和t時刻的理論細胞數N0和N t，據此計算：TD=0.301t/（log N t—log N0）；2 增殖細胞殺傷率（%）=( N0—N0’)/ N0×100%；3 細胞生長飽和密度（N s），代表高坪期每毫升細胞數的均數。
藥物與細胞共培養時間一般為48-72 小時，貼壁細胞需先貼壁24 小時后再給藥。試驗應設陽性及陰性對照組，陽性對照用一定濃度的標準抗腫瘤藥，陰性對照為溶媒對照
a、體外篩選方法的優點：
?操作簡單；
?用藥量少；
?取材可直接用于人體腫瘤；
?得出結果快速；
b、體外篩選方法的缺陷：
?細胞毒性易顯陽性，有毒物質也常常顯陽性，故假陽性率高；
?非直接對腫瘤細胞作用的藥物顯示假陰性；
?體外細胞并不能完全代表體內腫瘤的惡性細胞；
五、體內抗腫瘤活性試驗
1、自發性腫瘤
2、誘發的腫瘤
3、移植性腫瘤
（a）皮下腫瘤模型
選擇腫瘤生長旺盛且無潰破的荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，在無菌條件下（超凈臺或接種罩），用碘酒、酒精或新潔爾滅消毒動物皮膚，切開皮膚，剝離腫瘤。將瘤組織剪成1.5 mm3左右，用套管針接種于動物一側或雙側腋窩皮下；或制成細胞懸液，然后按一定比例加入無菌生理鹽水，一般每只小鼠接種腫瘤細胞數量為（1-5）×106。
（b）腹水瘤模型
無菌條件下，消毒動物皮膚，吸取生長良好的動物腹水，以生理鹽水按一定比例稀釋后接種于動物腹腔，接種細胞數量一般為（1-5）×106。
（c）原位接種模型
原位接種是指將來源于某臟器的腫瘤接種在動物的某臟器，如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。原位接種不是常規的方法，但有其優越性，是鼓勵使用的方法。主要有肺、肝、胃、腸、乳腺、顱內等原位接種方法。
小鼠腫瘤模型 淋巴細胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血病L-615、宮頸癌U14、肝癌H22、Lewis肺癌、黑色素瘤B16、網織細胞瘤M5076、腸癌26、腸腺癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤（EAC）、肉瘤-180等，以及各種小鼠腫瘤的亞型和耐藥株等。
人癌裸小鼠移植瘤模型 應選用體外試驗敏感細胞株進行體內抗人癌裸小鼠移植瘤試驗。
模型建立和使用應注意：
?移植瘤一般由相應的細胞株移植而建立，對細胞株和移植瘤的化療敏感性應予了解；
? 移植瘤復蘇后一般應傳2-3代后再用于體內抗腫瘤試驗；
? 對模型生長情況應全面了解，尤其是生長快的模型；
? 為了保持移植瘤的生物學特性和遺傳特性，復蘇后移植瘤體內傳代應少于 15-20代 ；
給藥方案和給藥途徑
分組當日開始給藥，根據不同藥物的代謝動力學和毒性反應等確定給藥方案。給藥途徑應與推薦臨床用藥的途徑相同。
給藥次數較多，或被試物質溶解性較差，靜脈給藥有困難時，可考慮使用腹腔給藥，但在評價藥效時要注意這兩種給藥途徑是有差別的。
可采取瘤周、瘤內、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗時一般不能應用腹腔給藥途徑。