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  • 發布時間:2019-04-03 22:14 原文鏈接: 新鮮實體組織樣本的制備(化學處理法)

    實驗方法原理化學處理法是將組織細胞間起黏著作用的鈣、鎂離子置換出來,從而使細胞分散開來。
    實驗材料

    胰酶組織

    試劑、試劑盒

    EDTA

    儀器、耗材

    尼龍網

    實驗步驟

    一、試劑的配制

    1. 0.2% EDTA 配制:稱 EDTA 0.2 g,加入 Hank 液 100 ml,封裝高壓消毒。置 0~4℃ 保存。

    2. 胰酶加 EDTA 配制:胰酶 0.25 g 加 PBS ( pH 7.0) 200 ml,濃度 0.125%,EDTA 0.2 g 加 PBS ( pH 7.0) 100 ml,濃度 0.2%。各取 40 ml 混合,分裝置冰箱保存,用時過濾即可使用。

    二、實驗方法

    1. 將組織切成薄片,置入試管中。

    2. 首先加入 EDTA 液 5 ml,室溫下 0.5 h,離心棄之。

    3. 再加入胰酶-EDTA 液 5 ml。在 37℃ 恒溫水浴振蕩器內 30 min。

    4. 用 300 目尼龍網過濾,離心沉淀 1000 r/min,5 min。再以生理鹽水洗 2~3 次。

    5. 細胞固定或低溫保存備用。

    展開


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