a稱取適量明膠培養基(營養明膠)，加入蒸餾水或去離子水，攪拌加熱意沸至完全溶解，分裝試管高層，116℃高壓滅菌15min，垂直放置待培養基凝固后，備用；
b挑取18~24h待檢驗培養物，以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度就點種于平板培養基；
c于20~22℃培養7到14天。明膠高層亦可于36±1℃培養；
d每天觀察結果，若因培養溫度高而使明膠本身液化時應不加搖動、將接種物放于2-8℃約10-90min待降溫后取出觀察，若果確實被液化，即為試驗陽性；平板試驗結果的觀察為在培養基平板點種的菌落上滴加試劑，若為陽性，10~20m落周圍應出現清晰帶環。否則為附性。