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  • 發布時間:2019-04-01 22:06 原文鏈接: 顯微鏡形態學觀察細胞凋亡——顯微鏡檢測法

    用透射電鏡觀察細胞凋亡可以用于:(1)可清楚地觀察到細胞結構在凋亡不同時期的變化;(2)電鏡形態學觀察是迄今為止判斷凋亡最經典、最可靠的方法, 被認為是確定細胞凋亡的金標準。

    實驗方法原理細胞凋亡發生時會出現一定的形態學特征,如胞膜有小泡生成,細胞固縮,核質濃縮,染色質凝聚,DNA降解,胞膜最終形成許多凋亡小體,然后被鄰近的巨噬細胞所吞噬。
    實驗材料

    Hela細胞Jurkat細胞

    試劑、試劑盒

    蒸餾水盼藍

    儀器、耗材

    光學顯微鏡倒置顯微鏡熒光顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡透射電子顯微鏡

    實驗步驟

    利用光學顯微鏡,借助相應的染色方法,可以觀察細胞凋亡時會出現的一系列形態特征。常用的染色法包括臺盼藍、吖啶橙 / 溴化乙啶(AO/EB)、Giemsa 和 HE 法等。在光學顯微鏡下可以觀察到核固縮、質濃縮和凋亡小體等典型的凋亡現象。

    電鏡形態學觀察法是一種比較經典、可靠的方法,被認為是確定細胞凋亡的金標準。電鏡下凋亡細胞表現為染色質凝集、核濃縮、核裂解、胞漿收縮和胞膜具有發泡現象及凋亡小體出現等。

    注意事項

    形態學方法的不足之處是它只能定性,不能有效的定量,而且判定時難免存在主觀性,故常作為其他檢測方法的基礎。

    其他

    細胞發生凋亡或壞死,其細胞DNA均發生斷裂,細胞內小分子量DNA片斷增加,高分子DNA減少,胞質內出現DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有 規律的發生在核小體之間,出現180-200DNA片斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區別。 

    來源于《細胞凋亡檢測的方法的研究進展》生物技術通報雜志。


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