3.2 國外獻血員中NAT檢測結果
從各國公布的NAT檢出的陽性標本資料總結中可以看出,盡管世界發達國家的血液安全水平已經大幅度提高,但是由于EIA“窗口期”所致的漏檢概率仍然有幾百萬分之一、幾十萬分之一甚至幾萬分之一，具體檢測結果見表2。
表2 國外獻血員中NAT檢測結果匯總
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國家 |
試劑 |
檢測方式 |
血清學陰性、NAT單獨陽性檢出情況 |
文獻 |
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美國 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; Roche Cobas AmpliScreen HIV-1 and HCV tests |
Chiron: 16人份，TMA, 化學發光檢測； Roche：24人份混合，PCR-ELISA |
1999.03-2002.03: HCV NAT+：170/39,721,404，即1/ 23萬； HIV-1 NAT+：12/37,164,054，即1/310萬 |
文獻14 |
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日本 |
Multiplex HBV/HCV/HIV-1 reagent( Roche 與日本共同研制) |
1999年7月1日-2000年1月31日，500人份； 2002年2月1日起，50人份混樣; 合格血液檢測 |
1999.7–2000.4： HBV NAT+ ：26／2560977，即1/9.8萬； HCV NAT+ ：9／2560977,即1/28.4萬； HIV-1 NAT+：0／256.1萬。 2000.2.1–2002.12.31： HBV NAT+：308 ／16012175，即1/5.2萬； HCV NAT+：46 ／16012175,即1/34.8萬； HIV-1 NAT+：6／16012175，即1/266.9萬 |
文獻15,16 |
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澳大利亞 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
2個點單人份，3個點16人份，TMA, 化學發光檢測； |
2000.06.07-2004.11.14： HCV NAT+-：9/4,489,550，即1/49.9萬； HIV-1 NAT+：1/4,489,5504，即1/449.0萬4,489,550 |
文獻17及個人交流（文獻18） |
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中歐 |
HCV PCR: Roche Cobas Amplicon; HIV PCR: 自己研制的PCR |
96人份混合 |
HCV NAT+：6/360萬，1/60萬；HIV NAT+：2/360萬，1/180萬 |
文獻19 |
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法國 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV；或Roche Cobas Ampliscreen HIV-1 and HCV結合the Organon Nuclisens 核酸提取儀 |
單檢，或8人份，或16人份,不考慮血清學 |
2001.07-2003.12： HCV NAT+：3/614萬，即1/205萬；HIV NAT+：2/614萬，即1/307萬 |
文獻20 |
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新加坡 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
單人份檢測 |
2000.10-2004.10: HCV NAT+：4／304,715,即1/7.6萬； HIV-1 NAT+：0／304,715，即0/30.5萬 |
個人交流（文獻21） |
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韓國 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
16人份 |
2004.06.14-2004.12.03，前期評估： 單采獻漿者24599，獻血者15597: HCV NAT+：1/40196； HIV NAT陽性：1/40196； 2005.01.01起，常規檢測 |
個人交流（文獻22） |
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南非 |
Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV assay; |
單人份 |
1999年: HIV NAT+: 2/19709,即1/1.0萬；HCV NAT＋: 0/19709 |
文獻23 |
3.3我國核酸篩查技術應用研究情況
3.3.1 我國核酸篩查技術應用
我國有關NAT血液篩檢研究的報道還比較少見。比較規范的血液篩檢研究更少，有的單位利用國產PCR試劑加電泳檢測的方法進行檢測，其實驗室交叉污染的問題很難控制。有關我國獻血者及原料漿中NAT檢測工作的情況總結于表3和表4。
表3 國內血液中心開展NAT檢測研究的情況
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單位 |
試劑 |
檢測方式 |
NAT陽性 |
文獻 |
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深圳保安區中心血站 |
美國Biotronics Tech HBV,HCV AmpliSensor試劑盒 |
20人份混合15000rpm離心濃縮，半自動熒光定量PCR檢測 |
HCV NAT+: 1/8805 (ALT 390U/L)； HBV NAT+: 抗-HBc陽性中：1/946；單項抗-HBc陽性中：5/495(1％) |
文獻24 |
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廈門血液中心 |
自行設計引物，HCV |
50人份混合，NucliSensExtractor 提取核酸，NASBA技術，混擴增，ECL 檢測 |
HCV NAT+: 2/10000,即 1／5000 |
文獻25 |
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江蘇省血液中心 |
華美HCV RNA試劑盒 |
單人份，PCR,電泳 |
HCV NAT+: 2/750，即1／375 |
文獻26 |
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上海血液中心 |
美國Chiron Procleix HIV-1/HCV |
8人份或24 人份混合；TMA技術；化學發光檢測 |
HCV NAT+: 0／103539; HIV NAT+: 0／103539; |
文獻7 |
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北京血液中心 |
匹基HCV/HIV-1 熒光PCR核酸檢測試劑 |
24人份混合，26000g離心濃縮，Roche核酸提取柱，熒光PCR |
HCV NAT+: 0/34373; HIV NAT+: 0/34373 |
文獻27 |
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多單位參加的國際合作 |
美國Chiron Procleix HIV/HCV |
16 人份混合；無菌采血管EDTA抗凝，TEAN自動混樣；TMA技術；化學發光檢測 |
HCV NAT+：2 /80259 (其中1個ALT 254 IU/ml) HIV NAT +：0/80259 |
文獻28 |
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深圳血液中心 |
Roche Ampliscreen HBV/HCV/HIV |
24人份混合，STAR2000自動混樣;Roche MPLC自動提取 核酸； Roche COBAS Amplicor 擴增和檢測 |
HCV NAT+: 0/16512; HIV NAT+: 0/16512; HBV NAT+: 8/16512,即1/2064 |
文獻29及個人交流(深圳血液中心,王良華，2005年５月) |
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沈陽血液中心 |
匹基HCV 熒光PCR核酸檢測試劑 |
24人份混合，26000g離心濃縮，Roche核酸提取柱，熒光PCR |
HCV NAT+: 0/8.3萬 |
個人交流(沈陽血液中心，李劍平博士，2005年6月) |
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中山中心血站及蕪湖中心血站 |
廈門長城，無錫三星，上海正業 HCV PCR |
單人份，PCR,電泳 |
HCV NAT+: 77/28098(1/365) |
文獻30 |
表4 國內原料漿開展NAT檢測研究情況
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單位 |
試劑 |
檢測方式 |
NAT陽性 |
文獻 |
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中國藥品生物制品檢定所 |
匹基HCV/HIV-1 熒光PCR核酸檢測試劑 |
24人份混合，26000g離心濃縮，Roche核酸提取柱，熒光PCR |
HCV NAT+: 0/19196; HIV NAT+: 0/19196 |
文獻31 |
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上海萊士血制品有限公司 |
匹基HBV/HCV/HIV-1 熒光PCR核酸檢測試劑 |
48人份混合，26000g離心濃縮，Roche核酸提取柱，熒光PCR |
HBV NAT+: 1/1401718 (1/140萬); HCV NAT+: 31/1401718 ( 1/4.5萬) ; HIV NAT+: 3/1250007 (1/41.7萬) |
文獻32 |
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中國藥品生物制品檢定所 |
Chiron Procleix HCV/HIV-1 Assay |
16人份混合，TMA技術；化學發光檢測 |
HCV NAT+ : 1/10032; HIV NAT+: 0/10032 |
個人交流（檢定所，白堅石博士，2005年1月） |
3.3.2 我國核酸篩查技術應用工作小結：
1）NAT檢出率：有限的研究數據表明，我國獻血者血液NAT檢出 率
HCV NAT+ 檢出率結果差異很大， 從1/365（國產試劑,電泳）～1/4.0萬～0/10.4不等； HIV NAT+檢出率 < 0/10.4萬；HBV NAT+為 1/946（anti-HBc+ 獻血者中) ～1/2088。我國原料漿NAT檢出率：HCV NAT+: 1/1.0萬～1/4.5萬; HIV NAT+： 1/41.7萬；HBV NAT+： 1/140萬（48人份混合）。
2）必須重視核酸檢測的質量控制體系：
注重避免交叉污染：
n 檢測方法：傳統的電泳檢測為開放式，不適合；
n 嚴格的核酸檢測實驗室設置和管理。
注重試劑質量：為適應血液混樣檢測對靈敏度的要求，一些國產血篩試
劑在臨床診斷試劑的基礎上已做樣品處理的改良，靈敏度（如匹基）在考察期間不錯。但仍有待完善，表現在：
n 靈敏度、重復性、特異性：進口NAT血篩試劑質量穩定，各批質量波動小；國產試劑批間差異問題；特異性問題。
n 內標：進口試劑每個檢測管均有內標，保證陰性結果的可靠性；國產試劑由于尚無法解決加入內標后靈敏度降低的問題，未加內標，因此存在假陰性問題。
n 自動化：進口試劑已有配套的檢測系統和軟件，便于大規模篩查；國產試劑尚在起步階段，尚不能實現自動化，沒有配套軟件。
標本留樣和處理：也是核酸檢測質量控制體系中的重要環節，否則在檢測之前病毒核酸已降解，造成假陰性檢測結果。根據我們的研究結果，用于NAT檢測的標本應用無菌留樣管采集。
4. 血液核酸篩查發展趨勢
4.1 NAT檢測先從原料漿開始實施，再在獻血者中實施:
NAT血液篩檢方法總是從血漿制品的原料漿的篩檢開始的,積累了充分的經驗后,才逐步應用到血站的采供血系統。例如, 日本從97年11月起在原料漿中進行NAT篩檢，1999年7月在東京都試用于獻血者中［33]；歐洲醫療產品規范委員會(CPMP)規定從1999年7月起所有的血漿制品的原料、中試產品和最終產品都應進行HCVPCR檢測,當時NAT只在少數血站進行評估,而大部分血站供血系統至今仍未進行NAT篩檢; 美國早在1994年FDA就曾提出血漿蛋白生產的原料漿必須進行NAT篩檢,而血站系統則從1999年才開始全面進行NAT的可行性評估[34]。
4.2自動化，集中化檢測
以地域為單位建立幾個大型的集中式的NAT血篩中心,既便于質量管理,又能節省檢測成本。例如,全日本只設3家NAT檢測中心,分區域對77家血液中心的標本進行HCV、HBV、HIV核酸檢測和分析[35]。又如美國紅十字會(ARC)在全美成立了3個NAT檢測中心,每天將所有ARC血站采集的血液集中到這3個檢測中心進行NAT檢測,據測算,盡管血液標本的冷鏈運輸消耗一部分費用,但集中檢測的成本仍低于各個血站單獨檢測。我國香港地區將血液標本送到澳大利亞進行NAT檢測也是這個道理。目前,歐洲各國的血站正在進行或已經完成整合,也正是順應了集中化管理的潮流。
4.3 混合樣本數逐漸減少
為降低成本,在保證靈敏度的前提下,NAT往往將一定數量的血液標本混合起來檢測。NAT檢測最初在歐洲普遍流行96人份樣本混合檢測,隨后逐漸更換成48人份,直至目前的24人份混合。TMA剛開始在美國ARC進行評估時,將128份血液標本混合起來檢測,隨后改成16人份混合[34]。日本1999年7月起用于獻血者篩查，2000年2月起由原來的500份混合檢測改為50份混合檢測［33］；新加坡從一開始就使用單人份血液標本進行NAT檢測。這樣更改的原因一是可以防止低拷貝的病毒陽性血液的漏檢,二是混合樣品增多,一旦發現陽性檢測結果,進一步拆分混合樣品,最終找到陽性血液標本的工作變得復雜耗時,有時還會影響正常的血液供應。
4.4 應考慮考慮成本－效益比
NAT對提高血液安全確實有幫助，從各國公布的NAT檢出的陽性標本資料總結中可以看出,盡管世界發達國家的血液安全水平已經大幅度提高,但是由于EIA“窗口期”所致的漏檢概率仍然有幾百萬分之一、幾十萬分之一甚至幾萬分之一,雖然從經濟學角度考慮,為了保障每年如此少數幾個人的安全而投入大量的人、財、物進行NAT血液篩檢,不太經濟,然而對于受血者來說,一旦輸入感染病毒的血液,被感染的概率就是100%。因此大多數國家從人權角度考慮,仍然在經濟允許的條件下開展NAT血液篩檢；但成本-效益的問題也是各國家所關心的［36-39］。
4.5 一些國家已在考慮加做HBV NAT
Chiron 已開發Ultrio，可同時檢測三項，初步臨床試驗數據表明，HBV NAT的檢出率較高：在新西蘭：檢出HBV NAT+： 1/1991，單人份檢測；新加坡： 1/6000，單人份檢測。而在國內，盡管由于混合檢測使HBVNAT的窗口期加長，HBV NAT+檢出率仍比較高，為1/946（anti-HBc+ 獻血者中) ～1/2088［25,29］。 因此，如果在國內開展NAT臨床服務工作，應考慮加做HBV NAT。