ANCA的檢測方法有許多種，包括IFF、RIA、ELISA、Western印跡法、斑點印跡法及免疫沉淀試驗等。首選方法為IFF，至今仍作為ANCA篩檢的“金指標”。在用IFF法檢測ACNA的同時進行ELISA的檢測將有助于疾病的動態觀察；靶抗原PR3或MPO的分辨將有助于某些特發性壞死性血管炎或壞死性腎小球腎炎的確診。Gross等(1993)作了ANCA和有關疾病的分析。陳素英等(1996)以IFF法檢測ANCA并對其與170例疾病的相關性作了報道。現介紹IFF檢測ANCA。
1操作步驟
(1)用肝素抗凝血分離白細胞，以0．01mol/L，pH7．4PBS液洗滌，制成細胞基質片，用95%乙醇固定5min。
(2)將1：20稀釋的血清標本滴加于底物片上，濕盒內37~C孵育30min。
(3)再將基質片分為三組，分別滴加1：10稀釋的FITC-羊抗人IgG、IgA和IgM，37~C孵育30min，洗滌3次。
(4)加2：1緩沖甘油封片，置熒光顯微鏡下觀察。
2結果觀察
C-ANCA：熒光將胞漿勾劃出清晰分葉核輪廓；P-ANCA：熒光集中核周圍形成環狀，或不規則塊狀；X-ANCA：表現為彌漫的胞漿熒光。
3注意事項
由于乙醇固定的基質片上抗核抗體(ANA)陽性血清易表現為P-ANCA假陽性，因此應采用多聚甲醛固定以分辨是否ANA與ANCA共存。
4臨床意義
C-ANCA是診斷多發性肉芽腫(Weaner’s granulomatosis，WG)非常敏感的指標，也少見于微小多動脈炎(microscopic polyarteritis，MPA)，Churg-Strauss綜合征、經典的結節性多發性動脈炎。P-ANCA見于腎性血管炎，急性進行性腎小球腎炎(rapidly pro-Gressive lomemlonephritis，PRGN)，風濕性和膠原性血管疾病。X-ANCA或P-ANCA見于潰瘍性結腸炎，自身免疫性肝炎，原發性硬化膽管炎。
ANCA在風濕病患者血清中陽性率為70．0%，與ANA和抗組蛋白(histone)有交叉重疊現象。在風濕病患者中，ANCA不僅存在于SLE中，類風濕性關節炎及皮肌炎患者的血清也可出現ANCA陽性。在腎臟疾病中，ANCA陽性率為72．85%，其分布較廣泛，多見于新月體腎小球腎炎、紫癜性腎炎、IgA腎病和局灶節段性腎小球硬化，但也可見于微小病變性腎病、急性間質腎炎、腎小球終末期病變等疾病中。
因此，不能以ANCA陽性而確診為局限于腎臟MPA或壞死性腎小球腎炎，腎組織學檢查仍不可缺少。
抗中性粒細胞抗體(ANCA)是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿中溶酶體酶發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激后，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶物質及白細胞抗原生成，刺激機體而產生ANCA。 用經典的間接免疫熒光技術（IIF）檢測ANCA，陽性熒光染色模型分兩種：胞漿型（cANCA）和核周型（pANCA）。報道一種特殊的熒光譜稱之為非典型ANCA（xANCA）。ANCA常與疾病的活動性有關，疾病緩解期滴度下降或消失。 cANCA：抗原主要是蛋白酶-3(PR3-proteinase)。cANCA主要見于韋格納肉芽腫（陽性率占80%，且與病程、嚴重性和活動性有關）。系Wegener(WG)肉芽腫病的特異性抗體。C-ANCA對呼吸道有親合性，致上下呼吸道壞死，肉芽腫形成。C-ANCA陽性也可見于少數顯微鏡下多動脈炎（MPA）、Churg-Strauss綜合征（CSS）、結節性多動脈炎（PAN）、少數巨細胞動脈炎、過敏性紫癜、白細胞破碎性皮膚性血管炎和白塞病。 pANCA：抗原主要為髓過氧化物酶（MPO）。pANCA不如cANCA具有診斷特異性。pANC陽性主要見于特發性壞死性新月體性腎小球腎炎（NCGN）、 顯微鏡下多動脈炎（MPA）。也可見于Churg-Strauss綜合征（CSS）、結節性多動脈炎（PAN）、SLE、RA、SS、SSc。在NCGN、MPA中pANCA和cANCA陽性率幾乎相同。相對而言，pANCA患者的血管炎病變程度重，常有多系統損害。 非典型ANCA（xANCA）：它代表了pANCA和cANCA的混合物。陽性見于潰瘍性結腸炎、自身免疫性肝炎和慢性炎癥疾病。