結晶性取本品少許,依法檢查(通則0981),應符合規定溶液的澄清度與顏色取本品0.10g,加0.1mol/L鹽酸溶液10ml溶解后,溶液應澄清無色;如顯色,與黃色或黃綠色4號標準比色液(通則0901第一法)比較,不得更深有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定。供試品溶液取本品約25mg,精密稱定,加7%磷酸溶液0.2ml溶解后,用流動相A定量稀釋制成每1ml中約含0.5mg的溶液對照溶液精密量取供試品溶液適量,用流動相A定量稀釋制成每1ml中約含1gg的溶液。雜質A對照品溶液取雜質A對照品約15mg,精密稱定,置100ml量瓶中,加6mol/L氨溶液0.6ml與水適量溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,精密量取1ml,置100m1量瓶中,用流動相A稀釋至刻度,搖勻。
系統適用性溶液取氧氟沙星對照品、環丙沙星對照品和雜質Ⅰ對照品各適量,加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中約含氧氟沙星5g、環丙沙星0.5mg和雜質I10g的混合溶液。靈敏度溶液精密量取對照溶液適量,用流動相A定量稀釋制成每1ml中約含0.1pg的溶液。色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相A為0.025mol/L磷酸溶液-乙腈(87:13)(用三乙胺調節pH值至3.0±0.1),流動相B為乙腈,按下表進行線性梯度洗脫;流速為每分鐘1.5ml;檢測波長為278m和262nm;進樣體積20μl。時間(分鐘)流動相A(%流動相B(%)1000000100系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖(278nm)中,環丙沙星的保留時間約為12分鐘,氧氟沙星峰與環丙沙星峰和環丙沙星與雜質I峰之間的分離度均應符合要求。
雜質E、雜質B、雜質C、雜質I和雜質D峰的相對保留時間分別約為0.3、0.6、0.7、1.1和1.2。靈敏度溶液色譜圖中(278nm),主成分峰峰高的信噪比應大于10測定法精密量取供試品溶液、對照溶液和雜質A對照品溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。限度供試品溶液色譜圖中如有雜質峰,雜質A(262nm)按外標法以峰面積計算,不得過0.3%;雜質B、C、D和E(278nm)按校正后的峰面積計算(分別乘以校正因子0.7、0.6、1.4和6.7),均不得大于對照溶液主峰面積(0.2%);其他單個雜質(278nm)峰面積不得大于對照溶液主峰面積(0.2%);各雜質(278nm)校正后峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的2.5倍(0.5%);小于靈敏度溶液主峰面積的峰忽略不計。干燥失重取本品,以五氧化二磷為干燥劑,在120℃減壓干燥6小時,減失重量不得過1.0%(通則0831)。熾灼殘渣取本品1.0g,置鉑坩堝中,依法檢查(通則0841),遺留殘渣不得過0.1%。重金屬取熾灼殘渣項下遺留的殘渣,依法檢查(通則0821),含重金屬不得過百萬分之二十。