米氏常數在酶學和代謝研究中均為重要特征數據 。
(1)同一種酶如果有幾種底物，就有幾個Km，其中尾值最小的底物一般稱為該酶的最適底物或天然底物。不同的底物有不同的Km值，這說明同一種酶對不同底物的親和力不同。一般用1/Km近似地表示酶對底物親和力的大小，1/Km愈大，表示酶對該底物的親和力愈大，酶促反應易于進行。
(2)已知某個酶的Km，可計算出在某一底物濃度時，某反應速度相當于Vmax的百分率。
(3)在測定酶活性時，如果要使得測得的初速度基本上接近Vmax值，而過量的底物又不至于抑制酶活性時，一般[S]值需為Km值的10倍以上。
(4)催化可逆反應的酶，對正逆兩向底物的Km往往是不同的。測定這些Km值的差別以及細胞內正逆兩向底物的濃度，可以大致推測該酶催化正逆兩向反應的效率，這對了解酶在細胞內的主要催化方向及生理功能有重要意義。
(5)當一系列不同的酶催化一個代謝過程的連鎖反應時，如能確定各種酶的Km及其相應底物的濃度，還有助于尋找代謝過程的限速步驟。
(6)了解酶的Km值及其底物在細胞內的濃度，可以推知該酶在細胞內是否受到底物濃度的調節。如酶的Km遠低于細胞內的底物濃度(低10倍以上)，說明該酶經常處于底物飽和狀態，底物濃度的稍許變化不會引起反應速度有意義的改變。反之，如酶的Km大于底物濃度，則反應的速度對底物濃度的變化就十分敏感。
(7)測定不同抑制劑對某個酶Km及Vmax的影響，可以區別該抑制劑是競爭性還是非競爭性抑制劑。