一、實驗目的
1.熟悉掌握薄層層析的實驗操作。
2.了解聚酰胺薄層層析法測定糖的原理和方法。
二、實驗原理
用于層析的聚酰胺有兩類，一類是錦綸66(尼龍)，另一類是錦綸6。在這兩類材質中，都含有大量酰胺基團，故統稱聚酰胺。聚酰胺以其－CO－或－NH－與極性化合物的－OH
或＝O
之間形成氫鍵，從而發生吸附作用。不同物質與聚酰胺之間形成氫鍵的能力不同。在聚酰胺膜上做層析分離時，流動相從薄膜表面流過，被分離物質在溶劑和薄膜之間按分配系數的大小，發生不同速率的吸附與解吸過程，從而使混合物得到有序的分離，使用顯色劑顯色，得到不同的Rf
值。
三、儀器和試劑
儀器
帶密封蓋的層析缸、聚酰胺板、毛細管、100℃的烘箱、電吹風、試管以及試管架等。
試劑
1. 糖的標準溶液：木糖、葡萄糖、果糖和蔗糖10mg/mL 水溶液。
2.樣品液：多糖的水溶液。
3.展開劑：⑴乙酸乙酯：乙酸：水＝2：2：1 ⑵氯仿：甲醇＝60：40(v：v)
4.顯色劑：⑴25％~50％硫酸 ⑵二甲苯1g，苯胺1mL 和85％磷酸5mL 融于50mL 丙酮中。
四、操作步驟
1.將聚酰胺板于100℃烘箱活化后冷卻至室溫，用毛細管點樣，點樣位置為從聚酰胺板下端1.5cm，兩側2～3cm，每個樣品點相距1～1.5cm，斑點直徑2mm。點一次吹干一次。
2.將展層劑于層析缸中平衡。數分鐘后，將聚酰胺板放入。
3.當展層劑移至距上端2～3cm 時，取出聚酰胺板吹干，均勻噴上顯色劑，于100℃顯色。
4.15～30min 后從烘箱取出，測量Rf 值。