實驗材料 細胞
試劑、試劑盒 RSBMS 緩沖液
儀器、耗材 Dounce 勻漿器
實驗步驟
1. 用 11 ml 冰上預冷過的 RSB 重新懸浮細胞，轉移到一個 15 ml 的 Dounce 勻漿器中
RSB（使組織培養細胞膨脹的低滲緩沖液）
10 mmol/L NaCl
2.5 mol/L MgCl2
10 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5
2. 讓細胞膨脹 5~10 分鐘。用相差顯微鏡監測膨脹過程。
3. 用研杵 B ( 小間隙型）研磨幾下使膨脹細胞破碎。
4. 立刻加入 8 ml 2.5x MS 緩沖液至終濃度為 1x MS。用封口膜封住勻漿器頂端，倒轉數次使溶液混勻（如果要進行標志酶檢測，還要留下部分勻漿 )。
2.5 x MS 緩沖液：
525 mmol/L 甘露醇
175 mmol/L 蔗糖
12.5 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5
2.5 mmol/L EDTA，pH 7.5
1 x MS 緩沖液：
210 mmol/L 甘露醇
70 mmol/L 蔗糖
5 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5
1 mmol/L EDTA，pH 7.5
5. 將勻漿轉至離心管中進行差速離心。用少量 MS 清洗勻漿器并將清洗液加入勻漿中，用 MS 緩沖液將體積加至 30 ml。
6. 勻漿在 1300 g 離心 5 分鐘以去除細胞核、未破碎的細胞和大的膜碎片。
7. 將上清倒在一個干凈的離心管中。
8. 重復“沉淀細胞核”步驟兩次。
9. 將上清移至一干凈離心管中，17000 g 離心 15 分鐘沉淀線粒體。
10. 棄去上清，用 Kimwipe 吸干離心管內表面。
11. 1X MS 重懸浮沉淀以漂洗線粒體，重復 17000 g 離心步驟。
12. 棄上上清，用適合后續工作的緩沖液重懸浮沉淀。
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