細胞周期測定可應用于:(1)作為生物相容性評價指標;(2)研究細胞凋亡;(3)作為選擇細胞的依據。
| 實驗方法原理 | 體外培養細胞 生長、分裂繁殖的能力,可用分裂指數來表示。它與生長曲線有一定的聯系,如隨著分裂指數的不斷提高,細胞也就進入了指數生長期。 分裂指數指細胞 群體中分裂細胞 所占的百分比,它是測定細胞 周期的一個重要指標,也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據。 |
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| 實驗材料 | 細胞 |
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| 試劑、試劑盒 | 胰酶甲醇培養液冰醋酸Giemsa染液 |
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| 儀器、耗材 | CO2培養箱普通顯微鏡培養皿蓋玻片吸管 |
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| 實驗步驟 | 一、消化細胞 ,將細胞 懸液接至內含蓋玻片的培養皿中。 二、CO2培養箱中培養48小時,使細胞長在蓋片上。 三、取出蓋片,按下列順序操作: PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來水沖洗。 四、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。 五、計算
分裂指數=分裂細胞 數/總細胞 數×100% 展開 |
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| 注意事項 | 操作時動作要輕,以免使蓋片上的細胞脫落。 |
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| 其他 | Giemsa染液配制
稱Giemsa粉末0.5 g,加幾滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油總量為33 ml)。56℃中保溫90-120分鐘。加入33 ml甲醇,置棕色瓶中保存,此為Giemsa原液。使用時按要求用PBS稀釋。一般稀釋10倍。 |
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