細胞培養常用器材及處理方法

一、玻璃器材

   常用的玻璃器材有各種規格的玻璃瓶、培養瓶、培養皿、吸管、離心管等。

   無論是初次使用還是培養后重復使用的玻璃器材均需要進行消毒處理。*使用的玻璃器材應先用自來水初步刷洗，然后用稀鹽酸溶液（1%）浸泡過夜，再用自來水沖洗，后處理方法與重復使用的器皿的處理。
重復使用的玻璃器皿的處理步驟：

（1）刷洗。用軟毛刷和優質中性洗滌劑刷洗，去除器皿內外表面的雜質。刷洗時注意不要用力過重，以防損壞器皿內表面光潔度，影響細胞生長；也不能留有死角。器皿數量大時，可使用超聲波清潔裝置，沖洗干凈后晾干。

（2）清潔液處理。將刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重鉻鉀清潔液中。清潔液配方如下，見表3-1：

           表3-1   清 潔 液 配 方
           名 稱    清  潔  液  濃  度
                            25%(弱液)    50%(次強液)    75%(強液)
  重鉻suan鉀              1000g          1000g              1000g
  濃 硫 酸               2500mL       5000mL           7500ML
  蒸餾水(或廢液)     7500Ml        5000mL            2500mL

  該清潔液具有高度腐蝕性，操作時必須穿長筒膠靴，戴防酸橡皮手套，圍裙和眼鏡，以防清潔液濺出而灼傷。在配液時還需注意將酸緩慢放入水中，以防酸遇水放熱產生酸濺出或使玻璃及陶制容器裂開而使清潔液外泄。切勿將水加入酸中，以防酸濺出。常用清潔液為75%和50%兩種。

  將玻璃器皿放入時裝入塑料網袋內，再浸入清潔液中，玻璃瓶內不要殘留氣泡。一般浸泡12~24小時后取出。在清潔液中取出的器皿先用自來水沖洗10次以上，再用單蒸水沖洗三次以上，后用雙蒸水（或去離子水）沖洗1~2次，晾干，包裝殺菌。一般用121℃磅高壓蒸氣滅菌20分鐘。玻璃濾器使用后及時用自來水沖洗濾器表面的剩余物，然后用單蒸水浸泡，除去濾板內堵塞雜物，若用濾膜則將濾膜丟棄，加4N鹽酸浸泡12小時以上，用自來水沖洗，再用單蒸水抽濾2次，雙蒸水(或去離子水)抽濾沖洗、包裝、121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。也可用5%潔消精浸泡20分鐘后，再按上述方法沖洗和滅菌。

二、塑料器材
體外培養細胞中塑料器皿的使用越來越多，有進口的，也有國產的。主要有多孔培養板、培養皿、培養瓶及吸嘴。多孔培養板有4孔、6孔、24孔、96孔等規格可供選擇。多數為進口產品，已消毒滅菌密封包裝，使用時只需打開即可.有一次性使用的，也有反復使用的。在我國不少實驗室，由于經費有限，經過清洗和消毒滅菌再使用的較多。

三、橡皮器材

應選擇質軟、耐高溫、毒性小的橡皮制品(盡量是硅制品)做各種瓶或試管的塞子、蓋子。新購置的橡皮制品，用自來水沖洗去除其表面粉粒和污物。先用5%naoh煮沸15分鐘，用自來水沖洗8次，再用4%鹽酸煮沸15分鐘，用自來水沖洗8次，單蒸水沖洗3次，雙蒸水(或去離子水)沖洗一次，晾干后包裝或置于鋁盒內，用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。

已用過的橡皮制品，先用自來水沖洗干凈，然后用洗衣粉加熱煮沸10分鐘后，用自來水邊沖邊用力攪動，以充分洗凈殘余洗衣粉，然后用蒸餾水煮沸2次，每次15分鐘，再用單蒸水沖洗2次，必要時還要用雙蒸水(或去離子水)沖洗一次，晾干后包裝或放于鋁盒內，用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。

四、金屬器材

細胞培養中需用多種金屬器材，用于解剖、取材、剪切組織及持取物件等，常用的有剪刀、鑷子、手術刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號針頭等。新的金屬器材，先用紙擦去表面的油脂，再用洗衣粉煮沸，或用1%碳酸氫鈉煮沸15分鐘，擦干后再用95%酒精紗布擦干，包裝或置鋁盒內于121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。
已用過的金屬器材，及時用酒精棉球擦干凈，包裝入鋁盒內于121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。

五、其他物品

紗布先用自來水洗凈后，再用單蒸水沖洗，然后用單蒸水煮沸2次，每次15分鐘，并經常用長鑷子翻動，再用單蒸水洗2次，晾干后折成八層包裝，用121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。

  注射器的針頭使用后，立即用自來水（或來蘇爾水）沖洗數次，沖洗出針頭內的剩余物，以免堵塞針頭，然后用單蒸水洗2~3次，再用95%酒精沖洗3次，包裝或置鋁飯盒內121℃高壓蒸氣滅菌20分鐘。

   用于細胞培養過程中的各種人工合成培養液、緩沖液和酶濾液等也需要進行除(滅)菌處理。緩沖液常用高壓蒸氣消毒。血清用56℃水浴滅活30分鐘。人工合成培養液等酶溶液用過濾除菌。安裝濾器時要防止濾膜裝偏而導致過濾失效，過濾時力量不能過大、過猛，以免濾膜破裂。濾液量多，用抽濾式或加壓式（正壓式）過濾裝置。濾液量少，可選用2.5cm直徑的小號濾器，直接套在小瓶（如青霉素瓶）上，以注射器推動壓力過濾。
消毒滅菌前所用的包裝材料可用牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒和特制玻璃（或金屬）消毒筒等，可根據器材大小、形態選用，采取局部包裝或部分包裝，并用線繩扎緊。