細胞生長曲線實驗

細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數生長期，呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。細胞生長曲線的測定一般可利用細胞計數法進行。

細胞

D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶

凈化工作臺 離心機 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養箱 吸管 培養瓶 吸頭 槍頭 24培養板 膠塞 微量加樣槍 紅血球計數板

1.  取生長狀態良好的細胞，采用一般傳代方法進行消化，制成細胞懸液。

2.  計數，精確地將細胞分別接種于21～30個大小一致的培養瓶內或培養孔（以24孔培養板為宜），每瓶或孔細胞總數要求一致，加入培養液的量也要一致。

3.  每天或每隔一天取出3瓶（孔）細胞進行計數，計算均值。培養3～5 d 常要給未計數的細胞換液。

4.  以培養時間為橫軸，細胞數為縱軸（對數），描繪在半對數座標紙上，連接成曲線后即成該細胞的生長曲線。

1.  細胞生長曲線雖然最為常用，但有時其反映數值不夠精確，可有20～30%的誤差，需結合其它指標進行分析。

2.  現在很多實驗室利用培養板采用MTT法進行生長曲線測定，較為簡便。

1.  標準的細胞生長曲線近似“S”形，一般在傳代后第一天細胞數有所減少，再經過幾天的潛伏適應期，然后進入對數生長期，達到平臺期后生長穩定，最后到達衰老。

2.  在生長曲線上細胞數量增加1倍時間稱為細胞倍增時間，可以從曲線上換算出。