羊附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)的含量。
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實驗原理
本試劑盒應用間接法測定標本中人附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)水平。用純化的羊附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)標準品和未知濃度的附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)待檢樣品，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人附紅細胞體病(Eperythrozoonosis)濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 8 | 標準品S1（72ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 標準品S2（48ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3（24ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 生物素標記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 標準品S4（12ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5（6ng/L） | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 說明書 | 1份 |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 10 | 封板膜 | 2張 |
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
操作步驟
1. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中加入50微升樣本，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。
5. 加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6. 洗滌：操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌：操作同4。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最