取試管6支，其中3支各精密加入對照品溶液1ml，另3支各精密加入供試品溶液1ml，置37℃±0.5℃水浴中，保溫5分鐘，精密加入預熱至37℃±0.5℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準確計時，在37℃±0.5℃水浴中反應10分鐘。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，取續濾液備用。另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃±0.5℃水浴中保濕10分鐘，
再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，取續濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法（附錄ⅣA）在275nm的波長處測定吸收度，算出平均值AS和A，按下式計算。
A×Ws×n 每1g含蛋白酶活力(單位)=As×W×10×181.19式中 AS為對照品的平均吸收度；A為供試品的平均吸收度；Ws為對照品溶液每1ml中含酪氨酸的量，μg；W為供試品取樣量，g；n為供試品稀釋倍數。
在上述條件下，每分鐘能催化水解血紅蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量，為一個蛋白酶活力單位。