胰蛋白酶與DNA相互作用的共振瑞利散射光譜及其分析應用研究

摘要　當胰蛋白酶與鯡魚精DNA ( hsDNA) 、鮭魚精DNA ( sDNA)以及小牛胸腺DNA ( ctDNA)之間發生相互作用時, 共振瑞利散射(RRS)會顯著增強, 并產生新的RRS光譜. 三者有近似的光譜特征, 其最大RRS峰分別位于307 nm ( hsDNA和sDNA體系)和290 nm處( ctDNA體系) , 另一散射峰位于350 nm處, 其散射強度(ΔI)與DNA或者胰蛋白酶的濃度成正比, 因此可用于蛋白質和DNA的相互測定. 當用胰蛋白酶測定DNA時, hsDNA, sDNA和ctDNA的檢測范圍分別為114 ×10 - 3～213, 211 ×10 - 3～215和315 ×10 - 3～119μg/mL ( ctDNA) , 它們的檢出限分別為014, 017和111 ng/mL. 當用hsDNA測定胰蛋白酶時, 其線性范圍為011～3010μg/mL, 檢出限為3910 ng/mL. 研究了最佳的反應條件、影響因素和結合產物的化學性質, 考察了胰蛋白酶與DNA的結合比, 推測了它們的結合方式, 并以胰蛋白酶作RRS探針, 發展了一種高靈敏、簡便和快速測定痕量DNA的新方法.