脂肪及結締組織的染色方法

實驗概要

掌握脂肪及結締組織的染色方法。脂肪的染色方法：脂肪染色常用脂溶性色素，如蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、油紅O等。這類染料既能溶于有機溶劑如乙醇、丙酮，又能溶于脂肪。由于該類染料在脂質中溶解度較大，染色時染料便從染液中轉移到被染的脂質中去，使脂質呈染液的顏色。主要用于顯示組織臟器的脂肪變性和類脂質的異常沉著。一般所說的結締組織是指纖維性結締組織而言，其結構特點是細胞間質內基質外含有較多的纖維成分，主要是膠原纖維、彈性纖維和網狀纖維，我們僅簡述這三種纖維的常見染色方法。

實驗步驟

1. 脂肪的蘇丹Ⅲ(Ⅳ)染色方法：
   1) 冰凍切片用70％乙醇漂洗，不超過30s。
   2) 切片入蘇丹Ⅲ(Ⅳ)染液中3~15min或延長至1h。
   3) 新50％~70％乙醇分化，直至洗去切片上的浮色為止，蒸餾水洗。
   4) 用稀釋1倍的明礬蘇木精淺染核1min或稍長。
   5) 用濾紙將切片及周圍的水分吸干。
   6) 用甘油或甘油明膠封固。
結果判定：脂肪呈桔黃色或桔紅色，細胞核淺藍色。

2. 結締組織的常見染色方法

   1) Mallory三色染色法：常用于判定多種組織、器官的病變程度及修復情況，區分腫瘤組織中的纖維成分與平滑肌。
染色步驟：
      A. 中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規脫蠟至水。
      B. 重鉻酸鉀液10min。
      C. 蒸餾水沖洗2min，蒸餾水2次。
      D. 酸性復紅液2min，蒸餾水稍洗。
      E. 苯胺藍液20min，95%乙醇快速分化。
      F. 直接用無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
結果判定：膠原和網狀纖維呈藍色。
   2) Van Gieson苦味酸酸性復紅法：可以顯示組織、器官的損傷、修復及硬化情況，特別是用于鑒別腫瘤組織中的膠原纖維與平滑肌纖維，可為診斷提供重要依據。
染色步驟：
      A. 組織切片按常規脫蠟水洗。
      B. 用Weigert蘇木素液染細胞核5~l0 min。
      C. 自來水充分洗滌數分鐘。
      D. 用顯微鏡檢查細胞核的著色程度，過深可用0.5%鹽酸乙醇分化。
      E. 自來水洗至變藍；用蒸餾水洗。
      F. 用Van Gieson液染1~5 min。
      G. 傾去染液，直接用95%乙醇分化和脫水。
      H. 無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
結果判定：膠原纖維呈深粉紅色，肌纖維、胞漿及紅細胞黃色，細胞核呈棕黑色或蘭黑色。
   3) 網狀纖維染色－Wider染色法：可以用來顯示病變組織網狀支架的破壞情況。特別是在腫瘤病理診斷中，網狀纖維染色對于鑒別來源于上皮組織和間葉組織的惡性腫瘤具有重要價值。
染色步驟：
      A. 組織切片脫蠟至水。
      B. 10%磷鉬酸，2~5min。蒸餾水沖洗，5min。
      C. 1%硝酸鈾，5s。蒸餾水沖洗，10s。
      D. 氧化銀溶液，5~10min。
      E. 95%乙醇速洗，1~2s。
      F. 還原液還原，1~2s。蒸餾水沖洗，2min。
      G. 0.2%氯化金調色，2~20s。蒸餾水沖洗，5min。
      H. 5%次亞硫酸鈉，2min。蒸餾水沖洗，2min。
      I. 核固紅染細胞核，5~10min。水稍洗。
      J. 常規無水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。
結果判定：網狀纖維呈黑色、細胞核呈紅色。