腦脊液的顯微鏡檢查

一、  細胞總數

1、直接計數法  如腦脊液標本比較清亮或微混，可用此方法。

用滴管吸取已混勻的腦脊液標本少許，直接滴入細胞計數板，充入計數池內，靜置2~3分鐘，低倍鏡下計數兩個池內的四角和中央大格共10個大格內的細胞數，即為1μl腦脊液中的細胞總數（紅、白細胞總數）。在書寫報告時，再換算成每升腦脊液中的細胞總數。

2、稀釋計數法  如果腦脊液的細胞過多、混濁或帶血的腦脊液可用血紅蛋白毛細吸管吸取混勻的腦脊液20μl，加入有紅細胞稀釋液0.38μl的小試管中，混勻后滴入計數池內，用低倍鏡計數4個大方格的細胞總數，乘以50，即為每微升腦脊液的細胞總數，最后換算成每升腦脊液的細胞總數報告。

二、白細胞計數

1、直接計數  非血性標本，用吸管吸取冰乙酸后全部吹出，使管壁僅附著少許冰乙酸，然后用同一吸管吸取少量混勻的腦脊液標本，數分鐘后紅細胞就會完全溶解，再滴入計數池內，按上法計數。

2、稀釋計數  如白細胞過多，可用白細胞稀釋液稀釋后，按上法計數，注意計數結果應乘以稀釋倍數。

3、血性標本的校正計數  混有血液的腦脊液標本混勻后，用1%的冰乙酸溶液稀釋后仍按上法計數。為了剔除因出血而帶來的白細胞，可用下式進行校正。

每微升CSF內白細胞校正數=每微升CSF未校正的白細胞數－

三、白細胞分類計數

1、直接分類法  在白細胞直接計數后，轉高倍鏡觀察，依據細胞形狀和細胞核的形態進行分類，共計數白細胞和內皮細胞100個，分別計算單個核細胞和中性粒細胞所占的比例，以百分數表示。如白細胞總數不足100個，則直接寫出單個核細胞和中性粒細胞的具體數字。如白細胞總數在30以下，可不做直接分類計數或改用染色分類計數。

2、染色分類法  腦脊液標本離心，取沉淀涂片，制成均勻薄膜，置室溫或37℃孵箱中，干燥后以瑞氏染色，油鏡下進行分類計數。以百分比表示之。如有內皮細胞，則另行描述報告。

四、注意事項

（1）腦脊液細胞計數應及時進行，一般應在1小時內進行。如放置過久，細胞會破壞或沉淀與纖維蛋白凝集成塊，導致計數不準確。標本須混勻后方可進行計數，否則影響結果。

（2）穿刺損傷血管，導致血性腦脊液，此時細胞總數已無意義，白細胞計數也須校正后才有意義。

（3）細胞計數時，如發現較多的紅細胞有皺縮或腫脹現象，應予以描述，以協助臨床醫生鑒別陳舊或新鮮出血。

（4）細胞計數時，須注意把紅細胞或淋巴細胞與新型隱球菌相區別：

A、新型隱球菌具有“出芽”現象，不溶于乙酸，滴加0.35mol/L的乙酸后，顯微鏡下仍保持原形，而紅細胞則被乙酸溶解消失，淋巴細胞則胞核和胞漿更為明顯。

B、滴加印度墨汁一滴，加蓋玻片，高倍鏡下見新型隱球菌有夾膜，不著色，而紅細胞或淋巴細胞無此現象。

（5）細胞計數板用完后，應用75%的酒精消毒60分鐘。忌用苯酚消毒，因有損計數池的刻度。

五、正常參考值

正常人腦脊液中無紅細胞，僅有少量白細胞。

成人：（0~8）×106/L

兒童：（0~15）×106/L

腦脊液中細胞多為淋巴細胞及大單核細胞，兩者之比約為7：3，偶見內皮細胞。

六、臨床意義

1、中樞神經系統病變的腦脊液，細胞數可增多，其增多的程度及細胞的種類與病變的性質有關。

2、中樞神經系統病毒感染、結核性或霉菌性腦膜炎時，細胞數可中度增多，常以淋巴細胞為主。

3、細菌感染時如化膿性腦膜炎，細胞數顯著增加，以中性粒細胞為主。

4、腦寄生蟲病時，可見較多的嗜酸性粒細胞。

5、腦室或蛛網膜下腔出血時，腦脊液內可見多數紅細胞。

6、細胞數增減程度和細胞種類與某些疾病的程度有關，如化膿性腦膜炎經過有效的抗生素治療后，細胞總數迅速下降；結核性腦膜炎患者在早期以中性分葉核細胞為主，以后則淋巴細胞較多；腦血管意外病人腦脊液中的紅細胞數目減少，結合臨床，預示著出血既將停止或已經停止。

七、病原體形態學檢查

1、細菌  臨床懷疑流行性腦脊髓膜炎或化膿性腦脊髓膜炎時，應做細菌學涂片檢查。操作如下：

（1）腦脊液標本2~3ml，以3000rpm離心15分鐘，去上清液，將沉淀物涂在潔凈玻璃片上，共制片2張，涂片自然或在37℃溫箱中干燥固定，且勿用火焰固定。

（2）涂片固定后，一張用亞甲藍染色，另一張用革蘭氏染色。

（3）革蘭氏染色涂片用于檢查肺炎雙球菌、流感桿菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、鏈球菌、大腸桿菌等，亞甲藍染色用于檢查腦膜炎雙球菌。如找到細菌，則按其染色性質及形態報告。

（4）如懷疑結核性腦膜炎，可將腦脊液標本靜置24小時，取其液面薄膜涂片，置37℃溫箱中干燥固定，作抗酸染色，油鏡下找抗酸桿菌。

（5）采集標本時應注意污染。顯微鏡觀察時應注意細胞內外的細菌形態，報告時應予以描述。

2、真菌檢查—新型隱球菌的檢查

（1）取腦脊液標本，以2000rpm離心10分鐘，沉淀物涂片，加經過過濾的優質細墨汁一滴，混合后加蓋玻片顯微鏡下檢查。

（2）先用低倍鏡觀察，如發現在黑色背景下有圓形透光小點，中間有一細胞大小的圓形物質，即轉用高倍鏡仔細觀察其結構，新型隱球菌直徑5~20μm，可見明顯的厚夾膜，周圍有較強的折光，并有出芽的球形孢子。

（3）發現上述特征，即可報告墨汁涂片找到“隱球菌屬”。并須進一步作真菌培養。

3、寄生蟲檢查  將腦脊液標本離心，其沉淀物全部倒在玻片上涂片，低倍鏡下檢查可發現血吸蟲卵、肺吸蟲卵、弓形體、阿米巴等。

4、病原體檢查的臨床意義  正常人腦脊液中無病原體。腦脊液標本中如找到病原體，為臨床提供了病因診斷的依據，有確定診斷的價值。如發現細菌，結合臨床表現，可以確診為該種細菌所致的腦膜炎；發現新型隱球菌，則可診斷為新型隱球菌性腦膜炎；發現血吸蟲卵或肺吸蟲卵，可診斷為腦性血吸蟲病或腦性肺吸蟲病。

八、細胞學檢查

為進一步診斷，除用一般涂片進行瑞氏染色分類外，近年來還采用玻片離心法、醋纖膜濃集法、細胞沉淀法等，使腦脊液中的細胞濃集、染色，再進行細胞學檢查，以提高診斷水平。

簡便的腦脊液細胞收集法是細胞沉淀室法，把腦脊液標本倒在沉淀管內，讓細胞直接沉降在玻片上，30~60分鐘后，水份即由沉淀管周圍的濾紙吸干，取下玻片干燥，先用瑞氏染液預染2分鐘，加pH6.0的緩沖液稀釋，1分鐘后沖洗，再用姬姆薩染液復染8~10分鐘，水沖洗，干燥后用油鏡檢查，并進行細胞分類計數。

如將微型細胞沉淀室同玻片一起離心（1000rpm）則為玻片離心法。細胞沉淀法和玻片離心法克服了腦脊液中細胞數目少和易破壞的特點，便于正確地進行分類計數，發現腫瘤細胞、白血病細胞等異常細胞，以及發現細菌和霉菌等。