色譜法是根據色譜峰的面積或高度進行定量分析的。色譜定量計算方法很多,目前比較廣泛應用的有歸一化法、內標法和外標法。
1. 歸一化法
如果試樣中所有組分均能流出色譜柱并顯示色譜峰,則可用此法計算組分含量。設試樣中共有n個組分,各組分的量分別為m1,m2,……,mn,則i種組分的百分含量為:
歸一化法的優點是簡便、準確,進樣量的多少不影響定量的準確性,操作條件的變動對結果的影響也較小,對組分的同時測定尤其顯得方便。缺點是試樣中所用的組分必須全部出峰,某些不需定量的組分也需測出其校正因子和峰面積,因此應用受到一些限制。
2. 內標法
當試樣中所有組分不能全部出峰,或只要求測定試樣中某個或幾個組分時,可用此法。
準確稱取m(g)試樣,加入某種純物質ms(g)作為內標物,根據試樣和內標物的質量比ms/m及相應的色譜峰面積之比,基于下式可求組分i的百分含量Wi%:
因為
所以
內標物的選擇條件是:內標物與試樣互溶且是試樣中不存在的純物質;內標物的色譜峰既處于待測組分峰附近,彼此又能很好地分開且不受其它峰干擾;加入量宜與待測組分量相近。
內標法的優點是定量準確,操作條件不必嚴格控制,且不象歸一化法那樣在使用上有所限制。缺點是必須對試樣和內標物準確稱重,比較費時。
3. 外標法(亦稱標準曲線法)
該法是在一定色譜操作條件下,用純物質配制一系列不同的濃度的標準樣,定量進樣,按測得的峰面積對標準系列的濃度作圖繪制標準曲線。進行試樣分析時,在與標準系列嚴格相同的條件下定量進樣,由所得峰面積從標準曲線上即可查得待測組分的含量。
外標法的優點是操作和計算簡便,不需要知道所有組分的相對校正因子,其準確度主要取決于進樣量的準確和重現性,以及操作條件的穩定性。