色譜柱檢測奶粉中雙氰胺（一）

1 前言

2013 年1 月，新西蘭牛奶及奶制品被檢測出含有低含量的有毒物質雙氰胺(二氰二氨Dicyanodiamide，DCD)，已經下令禁售含有DCD的奶制品。中國的進口奶粉八成來自新西蘭，全球60%以上的奶源產自新西蘭。新西蘭奶農通常會在牧草上噴灑雙氰胺，防止肥料中的副產品硝酸鹽流入河流和湖泊。

目前，還沒有相應的食品含量標準和檢測標準。默克密理博致力于分析方法的開發，為客戶提供簡便、快速的解決方案。雙氰胺極性較強，易溶于水，中性及酸性條件下易電離，適合使用默克密理博的兩性離子型親水作用(ZIC?-HILIC)色譜柱分離。同時，雙氰胺在218nm下有強紫外吸收，可以采用ZIC?-HILIC 色譜柱在HPLC-UV條件進行快速分析，亦可在LC-MS/MS進行痕量檢測。

2 儀器及試劑

2.1 儀器設備

2.1.1 色譜柱：ZIC?-HILIC, PEEK HPLC Column 250 x 4.6 mm, 5 μm, 200 ?(貨號:1.50458.0001)

2.1.2 HPLC：Agilent 1260HPLC(DAD檢測器)

2.1.3 單道移液器Transferpette?S，Digital adjustable 500-5000ul(貨號：704782 BR)

2.1.4微孔濾膜:0.45um,PTFE(貨號：SLFHX13NL)

2.1.5純水系統:Milli-Q3(Millipore)

2.1.6 PP離心管：50mL,帶蓋，含底座(貨號:114822BR)

2.2 試劑

2.2.1色譜乙腈:LichroSolv?Acetonitrile Gradient Grade(貨號:1.00030.4008)

2.2.2乙酸銨：Ammonium acetate for analysis EMSURE? ACS,Reag. Ph Eur(貨號:1.01116.1000)

2.2.3甲酸：Formic acid 98-100% for analysis EMSURE? ACS,Reag. Ph Eur(貨號:1.00264.1000)

2.2.4 2%甲酸溶液：取20ml甲酸，加入1000ml超純水中

2.2.5乙腈-甲酸溶液：取700ml乙腈(2.2.1),與300ml 甲酸溶液(2.2.4)混合

3 實驗方法

3.1 樣品處理

方法1:

取嬰幼兒配方奶粉2g于50mL PP管(2.1.6)中，加18mL 2%的甲酸水溶液(2.2.4)，加蓋密閉。搖振60秒，再超聲30分鐘，取出，再搖振60秒，放入離心機中離心(4000轉)，20分鐘。取出，吸取上清液50ul，于10ml PP管中，加入950ul乙腈，加蓋密閉，振搖60秒，吸取溶液，過濾，即得供試液。

方法2：

取嬰幼兒配方奶粉2g于50mL PP管中，加20mL 乙腈-甲酸水溶液(2.2.4)，加蓋密閉。搖振60秒，再超聲30分鐘，取出，再搖振60秒，靜置，吸取上層溶液，過濾，即得供試液。

加標樣品同法配制。

3.2 測試條件

3.2.1 色譜條件

流動相 (v/v): A-醋酸銨溶液(10 mM),B-乙腈

比例*：A:B=12：88

流速:1 mL/min

進樣量：20ul

*必要時設置如下方法對色譜柱進行再生和平衡：

3.3 測試結果

按照方法1處理，結果如下：

3.3.1 對照品測試結果

圖1 對照品圖譜(DCD濃度1.25ug/ml)

雙氰胺保留時間4.98min,理論塔板數13086,拖尾因子1.1.