蘇丹紅ⅠⅣ的同時測定

圖1.  辣椒醬提取物凝膠凈化色譜圖。

非食用色素是不能作為食品添加劑在食品中使用的色素，主要指一些工業用的化學合成染料。在眾多非食用色素污染食品事件中,辣椒制品中非食用色素的污染備受關注。辣椒制品中非法摻加的非食用色素主要是一些脂溶性紅色色素,其中最具代表性的是蘇丹紅類色素。本文采用LabTech AutoClean全自動凝膠滲析色譜凈化系統對辣椒醬樣品進行凈化并采用HPLC分析其中的蘇丹紅Ⅰ- Ⅳ，回收率在93.6%~101.7%之間，RSD小于8%，該方法靈敏可靠，適合于辣椒醬中蘇丹紅Ⅰ- Ⅳ的同時檢測。

蘇丹紅(Sudan dyes)是一種人工合成的油溶性偶氮類化工染料,廣泛用于溶劑、油、蠟的增色以及鞋、地板的增光，分為蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四種,都有致癌毒性,其中蘇丹紅Ⅳ毒性最大,已被國際癌癥研究機構列為三類致癌物之一,蘇丹紅禁止作為色素添加劑在食品和飼料中使用。

本文建立了凝膠柱凈化-高效液相色譜法檢測辣椒醬中蘇丹紅色素的方法，與國標方法相比，操作簡便，取得了理想的結果。

實驗部分

儀器與試劑

GPC AutoClean全自動凝膠滲析色譜凈化系統（萊伯泰科），LC600高效液相色譜系統（萊伯泰科）。

蘇丹紅Ⅰ-Ⅳ（中國標準物質中心），乙腈（色譜純，Fischer公司），甲醇（色譜純，Fischer公司），乙酸乙酯（AR.，北京試劑廠），環己烷（AR，北京試劑廠），正己烷（AR，北京試劑廠）。

圖2.  蘇丹紅標準凝膠凈化色譜圖。

標準溶液配制

蘇丹紅標準儲貯備液：分別精密稱取10mg蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ溶于少量乙腈,移入250 ml容量瓶中加乙腈至刻度，混勻，每升含蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各40 mg；

HPLC蘇丹紅標準溶液：吸取標準儲備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 ml，用乙腈定容至25 ml 容量瓶，此標準系列的濃度分別為0.16、 0.32、 0.64、 1.28、2.56 mg/L；

凝膠凈化蘇丹紅標準溶液：吸取標準儲備液0.4 ml，用乙酸乙酯：環己烷（1:1）定容至25 ml 容量瓶，此標準系列的濃度為0.64 mg/L。

樣品提取

稱取10.00g樣品于離心管中，加10ml水將其分散成糊狀，加入20ml正己烷，勻漿5min，3000rpm離心10min，取出正己烷，再加入10ml正己烷，并重復提取2次，合并3次提取液，加入無水硫酸鈉5g脫水，過濾后于旋轉蒸發儀上蒸干，加入5 ml乙酸乙酯：環己烷（1:1）充分溶解，作為待凈化樣品。

圖3.  辣椒醬蘇丹紅加標色譜圖。

樣品凈化

采用LabTech AutoClean全自動凝膠滲析色譜凈化系統，采用LabTech SX-3凝膠凈化住（25mm×300mm）。

在AutoClean控制軟件上編制辣椒醬中蘇丹紅凈化方法：輸液泵流速5 ml/min，滿環進樣（2 ml），檢測器檢測波長254nm，進樣針清洗次數2次，每次清洗體積3 ml。

采用時間窗收集模式，凝膠凈化蘇丹紅標準溶液再凝膠凈化系統中的流出特征，確定收集時間為12~24 min。

色譜條件

色譜柱：LabTech C18（250 mm × 4.5mm，5μm）；柱溫：35℃；流動相：乙酸水(165+1000) ：乙腈= 10: 90；流速：1ml/min；進樣量：20 μl。

圖4.  蘇丹紅時間重復性。

結果與討論

凝膠凈化條件

凝膠凈化系統是根據分子體積的大小將干擾分析的大分子及小分子物質去除，同時收集分析組分，從而達到樣品凈化的目的。所以凝膠凈化能達到良好的樣品凈化的基礎是目標分析物和干擾雜質有著不同的凝膠滲透色譜流出特征。

分別對辣椒醬提取物，蘇丹紅標準品，在AutoClean全自動凝膠滲析色譜凈化系統上進樣，得到相應的色譜圖（見圖1、圖2）。可以發現，蘇丹紅樣品的流出時間為14~24 min，而辣椒醬色譜圖表明在15 min前提取的物質已經基本流出，故AutoClean全自動凝膠滲析色譜凈化系統可以徹底去除辣椒醬提取5種對蘇丹紅分析的干擾物質（見圖3）。

凝膠凈化系統依據色譜留出時間進行凈化，故目標分析物的流出時間重現性對凈化效果的重復性有著重要作用，此實驗中對蘇丹紅在AutoClean全自動凝膠滲析色譜凈化系統中的流出時間重現性進行了考察（圖4），依次進行5次進樣，蘇丹紅標準樣品的保留時間分別為17.934、17.900、17.850、17.916、17.884 min，具有良好的時間重復性。

圖5.   蘇丹紅Ⅰ-Ⅳ液相色譜圖（此次為蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ）。

色譜標準曲線

在上述實驗條件下,分別取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標準使用液，以峰面積對含量繪制標準曲線，結果如下。

蘇丹紅Ⅰ標準曲線為Y=133199X-511，R2=0.9998，蘇丹紅Ⅱ標準曲線為Y=119168X-958.71，R2=0.9991；蘇丹紅Ⅲ標準曲線為Y=184466X-874.83，R2=0.9999，蘇丹紅Ⅳ標準曲線為Y=152112X-12.917，R2=0.9996。

檢出限

以3倍信噪比計算蘇丹紅Ⅰ-Ⅳ最小檢出量為10 mg/L。

加標回收率

通過回收實驗測得的回收率分別是：蘇丹紅Ⅰ為101.7%，蘇丹紅Ⅱ為99.1%，蘇丹紅Ⅲ為93.6%，蘇丹紅Ⅳ為99.5%。

精密度

采用加標樣品，經凝膠凈化處理，并用HPLC分析，連續分析5次，以峰面積計算精密度。蘇丹紅Ⅰ檢測的精密度是0.6%，蘇丹紅Ⅱ為3.6%，蘇丹紅Ⅲ為4.0%，蘇丹紅Ⅳ為8.0%。

結語

本文建立了凝膠凈化-HPLC檢測法測定辣椒醬樣品中蘇丹紅Ⅰ-Ⅳ的分析方法，操作簡單，回收率較高且比較穩定，可廣泛應用于辣椒醬中蘇丹紅的快速測定。