熒光計的工作原理是光源氙弧燈發出的光通過切光器使其變成斷續之光以及激發光單色器變成單色光后,此光即為熒光物質的激發光,被測的熒光物質在激發光照射下所發出的熒光,經過單色器變成單色熒光后照射于測樣品用的光電倍增管上,由其所發生的光電流經過放大器放大輸至記錄儀。