當微生物侵入血液迅速繁殖超出機體免疫系統清除這些微生物的能力時形成菌血癥或真菌血癥(統稱血流感染),并可感染血管外組織,屬臨床醫學急癥,應盡快采集血液進行培養。資料顯示,菌血癥或真菌血癥發病率近10年來持續增加,2007年美國共報告菌血癥發生66萬例,在各種感染中居首位,且死亡率高(20%~50%)。
血培養是采集患者血液標本并接種到培養瓶中,用以發現、識別引起菌血癥或真菌血癥的病原微生物,是診斷菌血癥和真菌血癥的基本而重要的方法。血培養結果對感染性疾病的診斷、治療和預后都有極為重要的臨床意義。
1.標本的采集和運送
1.1 總體要求
1.1.1 血培養的臨床指征:
患者出現以下一種或同時具備幾種臨床表現時可作為血培養的重要指征:
①發熱(≥38 ℃)或低溫(≤36 ℃),以間歇馳張型多見,革蘭陰性桿菌,如大腸埃希菌引起的感染可見雙峰熱;
②寒戰;
③白細胞增多(>10.0×10^9/ L,特別是有“核左移”時);
④粒細胞減少(<1.0>20/分或CO2分壓<32mmHg);以及肝脾腫大;關節疼痛;C反應蛋白、內毒素、降鈣素原升高等。
對新生兒可疑菌血癥,還應同時做尿液和腦脊液培養。
老年菌血癥患者可能不發熱或體溫不低,如伴有身體不適、肌痛或卒中,可能是感染性心內膜炎的重要指征。
1.1.2 血培養的采集時機:
只要懷疑患者有血流感染的可能,在考慮使用抗菌藥物之前,都應立即采集血培養標本。若患者已行抗菌藥物治療,則應選擇含有抗菌藥物吸附物的培養瓶,并在下一次抗菌藥物應用前采血培養。細菌通常在寒戰和發燒前1小時入血,此時為采集血培養標本進行病原菌培養的最佳時機。
1.1.3 血培養的次數:
要求:對懷疑菌血癥、真菌血癥的成人患者,推薦同時或短時間間隔(30~60分鐘)從不同部位(如雙臂)采集2~3套血培養標本,即“雙瓶雙側”。 至少做到“雙側雙瓶”。如有必要,可同時或短時間間隔內從下肢靜脈采血接種第三套培養瓶。
只有在疑似感染性心內膜炎或導管相關性感染患者的連續性菌血癥時在不同時間點采血才有必要,除疑似感染性心內膜炎或導管相關性感染患者(詳見3.4、3.5),在采集血培養后的2至5天內,不需要重復采集血培養。
嬰幼兒患者,需要同時采集2次(不同部位)血培養標本。
說明:以一個需氧瓶和一個厭氧瓶為一套血培養,作為常規血培養組合。所謂“雙瓶雙側”,是指從一個部位采血接種一套培養瓶,再從另一部位采血接種另一套培養瓶。所謂“雙側雙瓶”,是指從一個部位采血接種一個需氧瓶,再從另一部位采血接種另一個厭氧瓶。一次靜脈采血注入到多個培養瓶中應視為單個血培養。
研究表明,只做1套血培養,病原菌的檢出率僅為65%,兩套血培養為80%,三套血培養為96%。單瓶血培養不僅檢出率不高,而且難以區分污染導致的假陽性,結果很難做出臨床解釋,應該堅決予以廢除。
雖然兩套血培養采血時間習慣上通常間隔30~60分鐘,但研究結果顯示,與同時采集兩套血培養結果比較,在病原微生物的檢出方面不存在差異。
在抗菌藥物治療開始后的2至5天內,血液中的細菌不會立即清除。一般菌血癥或真菌血癥的患者可通過臨床表現來判斷療效,無需復查血培養或者連續監測血培養。
但有兩個例外:一是細菌性心內膜炎患者,對于其菌血癥或真菌血癥是否被清除,連續血培養可被用于評估和指導治療;二是與感染性心內膜炎無關的金黃色葡萄球菌血癥,對其陽性血培養的48至96小時追蹤可以很好地預測復雜的金黃色葡萄球菌血癥。
1.1.4 血培養的采血量:
要求:成年患者推薦的采血量為20~30ml, 每套不少于10ml,每瓶不少于5ml。嬰幼兒患者推薦的采血量應少于患兒總血容量的1%,每瓶不少于2ml。對于采用成品血培養瓶的實驗室,必須按照血培養瓶生產廠家的建議,采集足夠的血液標本。
說明:血培養采血量是影響病原菌檢出率的最重要的可變因素。一般情況下,成人菌血癥患者外周血中細菌濃度為1~10CFU/ml,成人血培養采血量在2~30ml之間時,病原菌檢出率與采血量成正比例增長。
血培養采血量達到或超過40ml時,檢出率雖然與采血量的增加不再成正比例增長,但檢出率仍會升高。兒童患者同樣有數據表明檢出率與血培養的采血量成正相關,但由于兒童患者血液中病原菌濃度較高,一般約為成人血流感染病原菌濃度的10倍,血培養標本量無需等同于成人。但是,兒童也可能發生低水平的菌血癥,血培養采血量要根據患兒的血容量和年齡確定。
1.1.5 血液標本在需氧瓶和厭氧瓶中的分配
要求:以一個需氧瓶和一個厭氧瓶為一套血培養,作為常規血培養的組合。當采血量不夠推薦的采血量時,應首先滿足需氧瓶,剩余標本再接種入厭氧瓶。
說明:采用一個需氧瓶和一個厭氧瓶的血培養組合與采用2個需氧瓶的組合相比,可檢出更多的葡萄球菌、腸桿菌科細菌和厭氧菌。真菌和嚴格的需氧菌(如假單胞菌和嗜麥芽寡養單胞菌)幾乎全部只能從需氧瓶中分離到的。
1.2 血培養標本的采集
1.2.1 皮膚消毒與防止血培養污染
要求:使用碘酊、次氯酸或洗必泰作為血培養的皮膚消毒劑,效果要優于碘伏。碘酊的作用時間不能少于30秒,碘伏的作用時間則需要1.5~2分鐘。
說明:碘酊與洗必泰的效果大體相當。洗必泰的作用時間和碘酊一樣,但是沒有過敏反應,因此在靜脈穿刺完成后不必擦去,但不能用于小于2個月的嬰兒皮膚的消毒。對年齡小于2個月的新生兒,需使用70%的異丙基乙醇進行皮膚消毒。消毒劑需要有足夠的作用時間以保證消毒效果。
1.2.2 標本采集部位
要求:從兩側上肢靜脈采血,“雙瓶雙側”采血培養。至少做到“雙側雙瓶”。必要時從下肢靜脈采血做第三套血培養。
說明:從動脈血或下肢靜脈采血病原菌檢出率并不高,且增加了抽血污染的機會。盡量避免從靜脈留置導管采血培養,因其常伴有高污染率。如果必須從留置導管內采血,也應同時從外周靜脈采集另外一個血培養標本以幫助陽性結果的判讀(參見3.4 導管相關血流感染)。
1.2.3 減少血培養污染的注意事項
要求:采血之前,血培養瓶的橡皮塞需使用70%異丙醇酒精消毒并干燥,然后再進行穿刺部位的皮膚消毒。嚴格按照1.2.1所述皮膚消毒方法操作,并等待足夠消毒時間。嚴格無菌操作,不允許在皮膚消毒后用手接觸待穿刺部位,除非帶有無菌手套。不推薦采血后更換注射器針頭接種血培養瓶,采用真空采