第一節 血培養的含義及臨床意義
當微生物侵入血液迅速繁殖超出機體免疫系統清除這些微生物的能力時形成菌血癥或真菌血癥（統稱血流感染），并可感染血管外組織，臨床上應該進行急癥處理，盡快采集血液進行培養。
血培養是采集患者血液標本并接種到培養瓶中，用以發現、識別引起菌血癥或真菌血癥的病原微生物，是診斷菌血癥和真菌血癥的基本而重要的方法。血培養結果對感染性疾病的診斷、治療和預后都有極為重要的臨床意義。
第二節 標本的采集與運送
一、總體要求
（一）血培養臨床指征
患者出現以下一種或同時具備幾種臨床表現時可作為血培養的重要指征：1.發熱（≥38 ℃）或低溫（≤36 ℃），以間歇馳張型多見，革蘭陰性桿菌（如大腸埃希菌）引起的感染可見雙峰熱；2.寒戰；3.白細胞增多（>10.0×109/ L，特別是有“核左移”時）；4.粒細胞減少（<1.0×109/ L）；5.血小板減少；6.皮膚、黏膜出血；7.昏迷；8.多器官衰竭；9.血壓降低；10.呼吸加快（呼吸率>20/分或CO2分壓<32mmHg）；以及肝脾腫大；關節疼痛；C反應蛋白、內毒素、降鈣素原或1，3-β-D葡聚糖升高等。
對新生兒可疑菌血癥，還應同時做尿液和腦脊液培養。
老年菌血癥患者可能不發熱或體溫不低，如伴有身體不適、肌痛或卒中，可能是感染性心內膜炎的重要指征。
（二） 血培養采集時間：
只要懷疑患者有血流感染的可能，在使用抗菌藥物之前，都應立即采集血培養標本。若患者已行抗菌藥物治療，則宜選擇含有抗菌藥物吸附物的培養瓶，并在下一次抗菌藥物應用前采血培養。
（三） 血培養采集次數（每次靜脈穿刺為一次血培養）：
對懷疑菌血癥、真菌血癥的患者，推薦同時或間隔短時間內于不同部位采集2-3套（每套包括1只需氧瓶和1只厭氧瓶）血培養標本。兒童患者，推薦同時于不同部位采集2-3瓶血培養標本。因為兒童患者很少見厭氧菌感染，因此推薦僅使用需氧瓶而不常規推薦同時做厭氧培養。
提倡全自動血培養儀器的使用，可以更早的發現某些患者，如重癥監護，移植或血管內置導管，或試驗性治療患者的敗血癥。通常情況菌血癥或真菌血癥的患者可通過臨床表現來判斷療效，無需復查血培養或者連續監測血培養。
（四） 血培養的采血量：
成年患者推薦的采血量每次每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。
嬰幼兒患者推薦的采血量，每瓶不少于2ml（少于患者總血量的1%）。
血培養采血量是影響病原菌檢出率的重要因素。成人血培養采血量在2-30ml之間時，病原菌檢出率與采血量成正比例增長[1,2,4]，每增加1ml血液，病原菌的檢出率就會相應增加。同樣有數據表明兒童患者檢出率與采血量成正相關[5]，但兒童患者血液中病原菌濃度較高，采血量無需等同于成人。實驗室應按照血培養瓶廠家的建議，采集足夠量的血液標本。對血液病患者或血容量相對較低的患者，建議使用兒童瓶來減少血液的采集量從而提高病原菌的檢出率。
（五） 血液標本在需氧瓶和厭氧瓶中的分配
以一個需氧瓶和一個厭氧瓶為一套血培養，作為常規血培養的組合e。當采血量不夠推薦的采血量時，應首先滿足需氧瓶，剩余標本再接種入厭氧瓶。
二、 血培養標本的采集
（一） 皮膚消毒
推薦使用碘酊、洗必泰或碘伏作為皮膚消毒劑。
消毒劑需要有足夠的作用時間以保證消毒效果（碘酊作用30s；碘伏作用2min）。洗必泰的作用時間和碘酊一樣，但是沒有過敏反應，因此在靜脈穿刺完后不需要擦去，但不能用于小于2個月嬰兒皮膚的消毒。對年齡小于2個月的新生兒，需使用70%的異丙基乙醇進行皮膚消毒。
（二） 采集部位
推薦從外周靜脈采集血液標本。
動脈血培養不及靜脈血培養的診斷率高，因此不予推薦。盡量避免從靜脈留置導管采血培養，因其常伴有高污染率。如果必須從留置導管內采血，也應同時從外周靜脈采集另外一個血培養標本以幫助陽性結果的判讀（參見導管相關血流感染）。
（三） 采集方法
要求：1.在采血之前，血培養瓶的橡皮塞需使用70%異丙基乙醇消毒并干燥，然后再嚴格按照皮膚消毒步驟操作進行穿刺部位的皮膚消毒，并等待足夠的消毒時間；2.嚴格無菌操作，不允許在皮膚消毒后用手接觸靜脈，除非帶有無菌手套；3.不推薦采血和接種血培養瓶更換注射器針頭；4.將已注入血標本的血培養瓶輕柔的顛倒混勻數次以防止凝固。
三、 血培養標本的運送
采血后應該立即送檢。如不能立即送檢，需室溫保存，切勿冷藏或放入孵育箱。
血培養瓶在接種前、接種后均不得冷藏或冷凍，否則會導致某些病原微生物死亡。接種后的培養瓶最好立即送到實驗室，最遲不能超過2小時。自動化連續監測系統雖有允許延遲上機監測微生物生長的原理,還是應該盡量減少延遲上機時間，否則可能導致檢測時間延長甚至假陰性結果。
四、 血培養標本的拒收標準
遇到下列血培養標本應拒收并且要求臨床醫生重新采集標本：血培養瓶上貼的標簽錯誤或未貼標簽；血培養瓶滲漏、破裂或明顯污染；血液凝固；瓶中含有除SPS以外的抗凝物質；用過期的血培養瓶采集標本；血標本采集后放置12小時以上。
五、 血培養標本中病原菌分離的關鍵因素
（一） 采血量
采血量與血培養陽性率有直接關系，增加血培養血量可以提高陽性率。
若實驗室收到少于推薦血量的標本，應在報告中注明 “該送檢血液標本量未達到要求，會影響結果的靈敏度和準確性”。
（二） 血液肉湯比例
正常人血液中含有能抑制微生物生長的物質。其中有補體、溶菌酶、吞噬細胞、抗體和抗生素（如病人采血培養前正接受抗生素治療）。為了減少這些抑制因子濃度從而降低其抑菌活性，通常血-肉湯比例應在1：5 到1：10的范圍，超過這個范圍可能會引起假陰性。一些商品化血培養瓶使用的血-肉湯比例小于 1：5，是因為在其中加了與血中抑制因子結合并使其失活的特殊物質。兒科病人的血標本可以被接種入專為兒童設計的血培養瓶，這些血培養瓶可以接種較少的血量卻保持了血-肉湯比例。
（三） 培養基的選擇
推薦使用商品化的培養基。使用添加抗菌藥物吸附劑（如樹脂或活性碳）的血培養瓶有助于提高已接受抗菌藥物治療患者血培養的病原菌檢出率，特別是能提高葡萄球菌和酵母菌的檢出率，增加細菌的分離速度，但同時也會增加污染菌的檢出率。
（四） 孵育條件
細菌和真菌血培養需要在標本采集和運輸至實驗室后放置于35℃孵育。全自動血培養儀器設置的溫度一般為35℃。在商品化的需氧血培養瓶中加入了不同量的二氧化碳，厭氧培養瓶中加入了二氧化碳和氮氣以利于不同種類細菌的生長。
（五） 血培養的孵育時間
自動化血培養系統的標準孵育時間為5天。傳統的手工方法，推薦孵育7天。全自動血培養系統培養5天后陰性血培養標本無需進行常規轉種f。
（六） 振搖
振搖血培養瓶，特別是在孵育的最初24小時內，能提高需氧瓶中微生物的檢出率和檢出速度。振搖厭氧血培養瓶也不會對細菌生長不利。目前使用的全自動儀器是持續地振搖血培養瓶。
（七） 監控頻率
以瓊脂基質作為血培養瓶的組成部分的雙向血培養瓶，需要每天進行目測檢查來檢測細菌生長。全自動血培養系統要求設定規律的10-24分鐘時間間隔來監測需氧和厭氧血培養瓶中細菌生長曲線。當出現提示微生物生長的陽性信號時再進行次代培養。
六、 幾種特殊要求的血培養
（一） 真菌血培養
懷疑真菌菌血癥的患者采用需氧血培養瓶采集標本。
研究證明，與厭氧瓶相比，酵母菌在需氧瓶中能夠更好的分離。多數酵母菌和酵母樣真菌能在孵育2至5天被檢測到，而一些酵母菌（如光滑念珠菌，新型隱球菌）則需要更長的孵育時間。雖然雙相真菌可以在多數商業化制備的需氧血培養瓶上生長，但檢測通常需要2至4周的時間。因此自動化血培養系統不宜用于雙相真菌的檢測。
（二） 導管相關性血流感染（Catheter related bloodstream infections，CRBSI）
1. 短期外周靜脈導管
通過兩次靜脈穿刺獲得病人的兩套外周血培養（雙瓶雙側）。無菌操作拔去導管并用Maki半定量方法[11]培養g。
培養結果的解釋：
(1) 如果一套或多套外周血培養陽性，而且導管片段也是陽性（半定量≥15個菌落）并且為同一種菌：提示CRBSI。
(2) 如果一套或多套外周血培養陽性，而且導管片段陰性：不可以下定論；但是如果外周血陽性結果是金黃色葡萄球菌或念珠菌屬，并缺乏其他感染的證據，提示CRBSI。
(3) 如果兩套外周血培養陰性，而導管片段陽性，不管菌落計數如何，提示導管定植而非CRBSI。
(4) 如果兩套外周血培養陰性，而且導管片段也是陰性，則不可能是CRBSI。
2. 中心靜脈導管及靜脈留置口
有兩種方法，其中方法一適用于想保留導管的患者，如果已經決定要拔除導管，則方法二更合適。
方法一:對懷疑患CRBSI的病人至少采集兩套血培養，其中至少一套采集來自外周血靜脈穿刺并做好標記，另一套應該同時或短時間間隔內從導管口或靜脈留置口隔膜無菌采集，并做好標記。