血清丙氨酸轉移酶（ALT）測定實驗

一、實驗試劑：

l. 0.1mol/L磷酸氫鈉溶液：磷酸二氫鈉（含二個結晶水）17.8g溶于水中并加水至1000ml，冰箱內保存。

2. 0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液：磷酸二氫鉀13.6g溶解于水中，加水至1000ml，冰箱內保存。

3. 0.lmol/L磷酸鹽溶液（PH7.4）：將420mol 0.1L磷酸氫鈉溶液180ml 0.1moL/L磷酸二氫鉀溶液混勻，加氯仿數滴。置冰箱內保存。

4. 底物緩沖液（DL-丙氨酸200 mmol／L.a-酮戊二酸2 mmol／L）：精確稱

取1.79gDL丙氨酸和29.2 mg a-酮戊二酸先溶于約50 m1 0.1mol/L磷酸鹽緩沖液中用l mol/L氫氧化鈉（約0.5 ml）調節至PH 7.4 在加磷酸鹽緩沖液至100 ml，置冰箱保存.可穩定2周，每升底物緩沖液可加入麝香草酚0.9g或加氯仿數滴防腐，置冰箱中至少可保存1個月，分裝安瓶滅菌后，室溫至少可用3個月。

5. 1.0 mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液：稱取19.8mg，2，4硝基苯肼，溶于10mmol/L的鹽酸中．完全溶解后，加蒸餾水至100ml，置棕色玻璃瓶，室溫中保存若有結晶析出，應重新配制。

6. 0.4mol／L氫氧化鈉溶液，將 16.0g氫氧化鈉溶解于水中，并加水至 1000ml，置具塞塑料試劑瓶內，室溫中可長期穩定。

7. 2mmol/L丙酮酸標準液：準確稱取22.0mg丙酮酸鈉（AR）置于100ml，置容量瓶中加0.05mol／L 硫酸至刻度。

二、實驗操作：在測定前取適量的底物溶液在37℃水浴箱內預溫5min后使用，具體操作接表1進行．

各管溫勻后，在37℃水浴保溫20min，然后各管加人0.4mol/L氫氧化鈉溶

液5ml，室溫放置5min，用分光光度計在波長505nm處以蒸餾水調零點，讀取各管吸光度，測定管吸光度減去樣本對照管吸光度，從校正曲線查得ALT活力單位。

標準曲線繪制

1. 按表2向各管加入相應試劑

2. 各管加人2，4二硝基苯肼溶液0.5ml，混合37℃20min后加入0.4mol/L

氫氧化鈉溶液5ml。

3. 根勻，放置5min后用分光光度計在波長505nm處，以蒸餾水調零點，讀取吸光度，各管吸光度減去“0”號管吸光度所得差值所對應的卡門酶活力單位做圖。

參考值：5-25卡門單位

1. 賴氏比色測定由于受底物a-酮戊二酸濃度和2，4二硝基苯肼濃度的不足以反應產物丙酮酸的反饋抑制等因素的影響，標準曲線不能在延長至200卡門單位。

2. 血清中ALT在室溫（25℃）可以保存2天，在4℃冰箱可保存一周，在25℃以下可保存一個月。

3. 嚴重脂血，黃疸或溶血血清可能會引起測定管吸光度增高，因此，檢測此類標本時，應做血清標本對照。

4. 當血清標本酶活力超過150卡門單位時，應將血清用生理鹽水稀釋5倍或10倍后再進行測定。

5. 加人2,4-二硝基苯肼溶液后，應充分混勻，使反應完全，加入氫氧化鈉溶液的速度要一致，不同的加入速度會導致吸光度讀數的差異。

6. 底物中的a-酮戊二酸和2,4-二硝基苯肼均為顯色物質，稱量必須很準確，每批試劑的空白管吸光度上下波動范圍不應超過0.015A如超過此范圍，應檢查試劑及儀器方面問題。

7. 成批ALT測定時各管加入血清后，試管架應置37℃水浴中操作，以一定的時間間隔各管加人底物緩沖液，每管即時混勻，以加人第一管開始計時，準確每反應30min。立即依相同的時間間隔，依次向各管加人2,4二硝基本肼亦每管即時混合，這樣，才能保證成批ATL測定的準確性。