網織紅細胞(網紅)計數值是反映骨髓紅系造血活力的參數，目前國內實驗室最常用的是使用煌焦油藍染色法，顯微鏡人工計數網織紅細胞。這種方法由于手工操作，人為影響因素較多，重復性差。我們應用美國COULTER MAXM五分類全自動血細胞分析儀測定網紅，與人工鏡檢法進行了比較，報告如下。
1 材料與方法
1.1 材料：COULTER MAXM全自動血細胞分析儀系美國COULTER公司生產。網紅測定試劑盒：美國COULTER公司生產，批號109150，由試劑A與試劑B組成，其主要成份分別是0.06%新亞甲基藍與0.15%硫酸。網紅質控物：美國COULTER公司生產，批號539500。煌焦油藍染色液。
1.2 全自動血細胞分析儀測定方法：
1.2.1 測定原理：新亞甲基藍著染紅細胞內RNA，酸性試劑使紅細胞內血紅蛋白滲出成為“影細胞”減少測試的干擾。處理的血液在儀器上通過VCS(電導、射頻、激光)的原理進行網紅的檢測，可提供網紅絕對值(＃）、網紅百分比(%)、網紅平均體積(MRI)、網紅成熟指數(MI)和一項彩色立體分布圖。
1.2.2 樣品采集：靜脈采血并用EDTA-K2抗凝(每ml血液用1.4～1.6mgEDTA-K2)，樣品均在4h內處理。
1.2.3 操作步驟：嚴格按說明書進行。
1.3 顯微鏡計數法：按照衛生部的《全國臨床檢驗操作規程》執行。
2 結果
2.1 精密度比較：
2.1.1 批內精密度試驗：取新鮮抗凝樣品8份，其網紅水平各不同，每份樣品測定10次，平均CV為6.8%，結果見表1。
表1 批內精密度試驗(n＝10)
標本 X-％ 范圍% s CV(%)
1 0.31 0.21～0.40 0.03 9.7
2 0.50 0.41～0.60 0.04 8.0
3 1.23 1.11～1.35 0.12 9.8
4 2.66 2.50～2.84 0.15 5.6
5 4.72 4.51～4.93 0.16 3.4
6 6.76 6.30～7.20 0.58 8.6
7 10.42 9.91～10.98 0.63 6.0
8 21.47 20.76～22.20 0.71 3.3
平均(CV) 6.8
2.1.2 批間精密度試驗：每天測定3種水平濃度的網紅質控物，連續10天，平均CV為9.39%，結果見表2。
表2 批間精密度試驗((n＝10)
質控物 定值% X-％ S CV(%)
水平Ⅰ 0.90 0.95 0.14 14.74
水平Ⅱ 2.60 2.55 0.24 9.41
水平Ⅲ 10.00 10.20 0.41 4.02
平均(CV) 9.39
2.2 攜帶污染率：取高值樣品1份，重復測定3次，隨即取低值樣品1份，重復測定3次，計算出攜帶污染率。攜帶污染率＝（L1－L3）／（H3－L3）×100％，其中的L1、L3分別為第1次和第3次低值樣品的測定結果，兩者相差取絕對值，H3為第三次高值樣品的測定結果［1］。本儀器測定網紅時的攜帶污染率為0.67%(其中L1＝2.60％，L3＝2.55％，H3＝10.00％），小于1%，符合要求。
2.3 血樣品測定結果比較：
2.3.1 病人樣品測定：任意選取50份門診及住院病人樣品，在用血細胞分析儀測定網紅計數的同時，行顯微鏡人工計數，每份樣品推取兩張血片，用煌焦油藍染色液進行染色，由兩名有經驗的檢驗人員分別計數1000個紅細胞中的網紅，取均值與血細胞分析儀法結果比較。結果：人工方法(1.68±0.41)%，血細胞分析儀法(1.86±0.41)%，t檢驗t＝1.914，P＞0.05。從結果可看出，兩種分析方法結果比較差異無顯著性意義，相關性好(r＝0.98)。
2.3.2 參考值范圍：我們對70名RBC、HGB、MCV、RDW和血沉等血液指標檢查正常的體檢者(男性40名，女性30名，年齡為18～65歲，來自泉州市鯉城區委)，用血細胞分析儀檢測網紅，結果為(1.60±0.50)%，參考范圍是0.60～2.60%。
3 討論
網紅計數在臨床上應用非常廣泛，不僅用于貧血的診斷，也作為觀察骨髓增生狀況的一個良好手段。目前網紅測定的方法主要有顯微鏡法、流式細胞儀法(FCM法)、自動網紅計數儀法、全自動血細胞分析儀法，這些方法各有其優缺點［2］。目前國內多采用顯微鏡法，操作費工費時，受主觀因素影響，計數精確性差。所以，實驗室需有一個快速、精密、敏感性高的計數方法。
流式細胞儀(FCM)的問世，開創了生物細胞研究的新領域，也為網紅測定提供了快速、準確的實驗手段，這方面報道的文獻很多［2，3］。全自動網紅計數儀的臨床應用價值也被公認，但由于其僅能測試網紅，從而影響了其應用。以上兩種方法，由于經濟等因素的制約，限制了在常規實驗室中的發展。1993年以來，可進行網紅計數的血液分析儀相繼問世，使血細胞分析儀的應用進入了新的階段，其代表是COULTER MAXM型全自動血細胞分析儀，它采用VCS技術，不僅能檢測有關白細胞、紅細胞、血小板等22項測量參數，還可進行網紅的測定。VCS技術是利用細胞的體積、高頻傳導性和激光散射進行測定的三維分析技術。被新亞甲基藍染色的網紅與成熟紅細胞、白細胞、血小板區分開，儀器自動測定30秒，有768～32000個細胞被計數分析，保證了結果準確。
前面已述，目前仍在使用的顯微鏡法精確性較差，文獻報道CV為22.2～25.7%［4］。我們的實驗結果表明，自動血細胞分析儀法批內平均CV為6.8%(3.3～9.8%)，批間平均CV為9.39%(4.02～14.74%)，與文獻報道一致［2］。雖與FCM法CV4.3%(1.7～6.6%)［2］、6.0%(2.9～8.2%)［3］有一定差距，但較顯微鏡法有較大提高，為臨床提供了較為可靠的實驗數據。自動血細胞分析儀法與顯微鏡法具有良好的相關性，r＝0.98，t檢驗P＞0.05，差異無顯著性意義。操作簡單，檢測速度快，每個樣品的測定時間只要1分鐘(染色時間除外，分析儀實測30秒)，適合于常規大批樣品的檢驗，消除了人為誤差，減輕了工作強度。
綜上所述，COULTER MAXM全自動血細胞分析儀測定網紅準確性高、精密度好、檢測速度快、攜帶污染率低，尤其適合大批樣品的快速測定。同時操作簡便，樣品用量少，是常規實驗室測定網紅理想可靠的方法。