1. 10ml菌液過夜培養至飽和(OD600值為2-3)
2. 離心沉降細胞(Sorvall中以2000rpm的速度),然后以冷的、等體積的無菌蒸餾水洗滌
3. 將細胞沉淀在200μl 裂解緩沖液中重懸浮,然后加入約300μl 玻璃珠和200μl的1:1苯酚:氯仿混和液
4. 漩渦搖勻1-2min
5. 加入200μl的 TE緩沖液,倒置混合6-10次。注意:從這步開始漩渦搖勻可能會剪切DNA
6. 在微型離心機中以13000rpm的速度離心樣品5min
7. 將上層的水相轉移到干凈的微量離心管中
8. 加入1體積(400μl)氯虜⒎旌蟤ix by inversion
9. 同第6步離心
10. 將上層的水相轉移到新的微量離心管中
11. 加1ml乙醇,翻轉混勻
12. 在微型離心機中以13000rpm的速度離心2min
13. 棄上清液,用1ml的70%乙醇洗滌沉淀
14. 完全棄去上清液,并將沉淀在室溫下干燥。在干燥過程中沉淀顏色會發白但無酒精味
15. 在 400μl 含有最后濃度為2μg/ml的 核糖核酸酶的TE 緩沖液中重懸浮沉淀 16. 37℃培養10min
17. 重復9-12步
18. 在 50μl TE中重懸浮沉淀
裂解緩沖液: 2%(v/v)Triton X-100, 1%(v/v)SDS, 100mM NaCl, 10mM Tris 堿(pH8.0), 1mM EDTA(pH8.0)
TE緩沖液: 10mM Tris堿(pH8.0), 1mM EDTA(pH8.0)
YPD: 1%酵母浸膏, 2%細菌用蛋白胨,2%葡萄糖, 20min/升 高壓滅菌
酸洗玻璃珠: 425-600μm,Sigma公司,G8772,使用前高壓滅菌