隨機孢子分析
1)孢子形成
1.挑已形成孢子的二倍體單菌落接種在YPD平板上,盡可能把細胞涂薄一些,在30℃下培養12~16小時,超過16小時將明顯降低孢子的形成率。
2.上午,用一個無菌殼板釘取相當一火柴頭量的細胞,轉到含有2.5ml產孢培養基試管中,在25℃下旋轉振蕩培養。
3.用光學顯微鏡檢測孢子形成情況。要使5%以上的細胞形成孢子需花2~10天。
2)隨機孢子
4.取1ml形成孢子的培養物轉到15ml的錐形聚苯乙烯離心管,用醫用離心機離心5分鐘沉淀細胞。
5.徹底除去上清液,把細胞懸浮在0.2ml無菌水和5μl β-葡糖苷酸酶(約500個單位)。
6.在30℃條件下旋轉振蕩培養1小時。
7.加0.1ml(約0.15克)滅菌的0.5mm玻珠,在30℃條件下旋轉振蕩培養1小時。
8.加1ml無菌水。
9.振蕩1~2分鐘,用光學顯微鏡檢查子囊是否完全破裂。
10. 加4ml無菌水。
11. 用無菌水做10-1~10-3稀釋度,在含有60μg/ml刀豆氨酸的SC-arg平板上涂200μl。