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  • 發布時間:2019-04-30 21:54 原文鏈接: 酵母遺傳學方法7:隨機孢子分析

    隨機孢子分析

    1)孢子形成

    1.挑已形成孢子的二倍體單菌落接種在YPD平板上,盡可能把細胞涂薄一些,在30℃下培養1216小時,超過16小時將明顯降低孢子的形成率。

    2.上午,用一個無菌殼板釘取相當一火柴頭量的細胞,轉到含有2.5ml產孢培養基試管中,在25℃下旋轉振蕩培養。

    3.用光學顯微鏡檢測孢子形成情況。要使5%以上的細胞形成孢子需花210天。

     

    2)隨機孢子

    4.1ml形成孢子的培養物轉到15ml的錐形聚苯乙烯離心管,用醫用離心機離心5分鐘沉淀細胞。

    5.徹底除去上清液,把細胞懸浮在0.2ml無菌水和5μβ-葡糖苷酸酶(約500個單位)。

    6.30℃條件下旋轉振蕩培養1小時。

    7.0.1ml(約0.15克)滅菌的0.5mm玻珠,在30℃條件下旋轉振蕩培養1小時。

    8.1ml無菌水。

    9.振蕩12分鐘,用光學顯微鏡檢查子囊是否完全破裂。

    10.  4ml無菌水。

    11.  用無菌水做101103稀釋度,在含有60μg/ml刀豆氨酸的SCarg平板上涂200μl


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