銀杏葉含量測定方法（槲皮素、山奈素、異鼠李素）

   銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉。2005版《中國藥典》一部采用高效液相色譜法，以槲皮素、山奈素、異鼠李素為對照，測定總黃酮苷的含量。

    一、高效液相色譜法

    2005版《中國藥典》銀杏葉含量測定項下：

    色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）為流動相；檢測波長為360nm。理論板數按槲皮素峰計算應不得低于2500。

    供試品溶液的制備：取本品中粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小時，棄去溶劑，藥渣揮干，加甲醇回流提取4小時，提取液蒸干，殘渣加甲醇-25%鹽酸溶液（4：1）混合液25ml，加熱回流30分鐘，放冷，轉移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，即得。

    用HPLC法測定銀杏葉總黃酮苷的含量時，常用的流動相系統為甲醇-磷酸系統。

    ①日本島津LC-6A系列高效液相色譜儀；色譜柱為YWG-C18（10μm,25cm×4.0mm）；流動相：甲醇-水(含0.4%磷酸)（52：48）；檢測器：紫外光檢測器；波長360nm；柱溫30℃。

    ②Waters高效液相色譜儀；色譜柱為Novaplal C18(300mm×3.9mm,4μm)；流動相：甲醇-水（50：50），磷酸調pH為2.5；檢測波長360nm；柱溫40℃。

    ③Waters高效液相色譜儀；色譜柱為Spherisor Rb-18(10μm,250×4mm)；流動相：甲醇-水-磷酸（55：44.5：0.5）；柱溫25℃；檢測波長370nm。

    ④島津LC-6A高效液相色譜儀；C18柱(10μm,3.9mm×300mm)；流動相：甲醇-0.5%磷酸水溶液(48：52)；檢測波長368nm。

    其它如：袁龍測定銀杏葉片劑總銀杏黃酮的含量，采用島津LC-10A VP高效液相色譜儀；色譜柱為Hypersil ODS 柱（205mm×4.6mm,5μm）；流動相：磷酸緩沖液（pH2）-四氫呋喃-甲醇-異丙醇（60：15：10：15）；檢測波長380nm.

    池靜端等用反相高效液相色譜法測定了銀杏葉中槲皮素、異鼠李素、山萘酚等6種黃酮成分的含量。采用HP1090型高效液相色譜儀；色譜柱為Zorbax ODS C18 柱(150mm×4mm，5μm)；流動相：A.MeOH, B.四氫呋喃(THF)-H2O-HCOOH(34：65：1)，梯度洗脫；；檢測波長350nm；柱溫25℃。以單酚酸B(salvianolic acid B)為內標。銀杏葉用丙酮和鹽酸混合溶液回流提取。     二、毛細管電泳法

    佘佳紅等以超臨界流體萃取(SFE) 銀杏葉粗提物中槲皮素和山奈素, 以膠束電動毛細管色譜法(MECC) 測定這兩種成分的含量。SFE條件：壓力42mPa；溫度60℃；改性劑0.2ml乙醇；動態萃取體積4ml；靜態萃取時間4min；接收液乙醇。膠束電動毛細管色譜條件：空心熔融石英毛細管柱(55cm×75μm)；電壓18kV；緩沖液的終濃度25mmol/L NaH2PO 46.25mmol/L-Na2B4O7；SDS 35mmol/L；pH8.5；溫度29℃；檢測波長254nm；進樣時間8s。