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  • 發布時間:2020-07-13 11:07 原文鏈接: 飼養層細胞共培養體外擴增原代CD34+細胞

    試劑和材料:
    1. MSCs培養基;
    2. 6孔培養板;
    3. 絲裂霉素C,100μg/ml;
    4. 共培養的培養基:IMDM添加10%FBS,100U/ml青霉素和100μl/ml鏈霉素;
    5. 細胞因子(干細胞因子,IL-6,Flt-3配體,促血小板生成素);

    實驗方法:
    1. 將臍帶血來源的間充質干細胞(CB-MSCs)作為飼養層細胞,用MSCs培養基重懸CB-MSCs,細胞濃度為5×104個細胞/ml;
    2. 將CB-MNCs接種到6孔板;
    3. 每周兩次半量更換新鮮培養基;
    4. 當CB-MNCs達到90%以上匯合時,用10μg/ml絲裂霉素C處理,37℃ 2.5h;
    5. 用無血清IMDM將CB-MNCs洗兩遍;
    6. 按1×104/ml CD34+細胞重懸于含細胞因子的共同培養基(100ng/ml干細胞因子,100ng/ml IL-6,50ng/ml Flt-3配體,10ng/ml促血小板生成素);
    7. 將CD34+細胞接種到CB-MSCs飼養層細胞上;
    8. 每周兩次更換1/4培養基;
    9. 2周后,收集未貼壁細胞;


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