高GC含量片段的PCR擴增實驗

甜菜堿dNTP 溶液二甲基亞砜四甲基砜Taq 酶和酶緩沖引物

PCR 儀

一、材料

1. 試劑

甜菜堿（Sigma 公司）

dNTP 溶液（含四種 dNTP, 每種 25 mmol/L)

二甲基亞砜（DMSO)(Sigma 公司）

四甲基砜（Sigma 公司）

2. 酶和酶緩沖液

Taq 酶

Taq 酶緩沖液（Taq 酶制造商提供）

3. 核酸和寡核苷酸

人類基因組 DNA，每個反應中 20ng，

hRF3(hGSPTl) 引物：hRF3f   CCGC/CTCT/GTCG/TCGT/CGC

                                   hRF3r   CCGC/GCTG/AGGT/TCTC/CC

Klotho 外顯子 la 引物：klolaf   CTCG/CAGG/TAAT/TATT/GCCAG

                                     klolar   GATG/GACG/CACC/CTTG

Klotho 外顯子 lc 引物：klolcf   GTGC/AGCC/CGTG/GTCAC

                                   klolcr   GACT/CAGT/TCCC/ACAC/TTC

4. 設備

PCR 儀

5. 其他

瓊脂糖凝肢電泳所需設備和試劑

二、方法

1. 在滅菌的 0.2 ml 的 PCR 管中加入下列試劑。

基因組 DNA                                20ng

引物（每種）                             15pmol

Taq 酶                                         0.5U

10 x buffer                                  2.5ul

dNTP 溶液（含四種 dNTP)         250umol/L

加 H₂0 到                                    25ul

根據處理條件的不同，分別包含 DMSO(5%)、甜菜堿（lmol/L)、甜菜堿（2mol/L)、甜菜堿（lmol/L) 和 DMS0(5%)、甜菜堿（2mol/L) 和 DMS0(5%)、四甲基砜(0.4mol/L)，對照不加任何其他試劑。

2. 采用下列程序 A 或 B 運行 30 個循環。