將RRBC加入正常人血清中，可使B因子活化，激活補體旁路途徑致使BRBC溶解。將正常人新鮮血清加熱使B因子喪失活性（簡稱RB），旁路途徑不能激活，當加入RRBC時不發生溶血。此時再加入含有B因子的待測血清，旁路途徑即被激活，RRBC發生溶血反應。根據溶血程度可測定待測血清中B因子的活性。
1、兔紅細胞（rabbitredbloodcell，RRBC）懸液的制備 無菌采兔耳靜脈或心臟血，用阿氏液抗凝，分裝，4℃保存。可用1周左右。試驗時取一定量的RRBC，用EGTA—GVD2應用緩沖液洗滌3次，并用該緩沖液配制成3×108個/mL細胞懸液。
2、RB的制備 取新鮮正常人混合血清（3人以上），56℃水浴加熱15min，滅活其中B因子，新鮮使用或分裝后凍干保存。
3、取一定稀釋度的受檢血清與一定量的RB和 1%RRBC懸液混合，置37℃水浴30min，離心，取上清用分光光度計429nm讀取吸光度（A）值，以參考血清A值作為100％進行換算，低于 60％者判定為B因子溶血活性降低。